[發(fā)明專利]褪黑素協(xié)同細胞外基質(zhì)生物材料在制備促進間充質(zhì)干細胞成骨分化藥物中的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310747944.0
• 申請日: 2013-12-31
• 公開（公告）號: CN103736150A
• 公開（公告）日: 2014-04-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 龔逸鴻;何帆;曾易;劉小珍;蔣慶
• 申請（專利權(quán)）人: 中山大學
• 主分類號: A61L27/38
• 分類號: A61L27/38;A61L27/54
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 陳衛(wèi)

1.褪黑素協(xié)同細胞外基質(zhì)生物材料在制備促進間充質(zhì)干細胞成骨分化藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述細胞外基質(zhì)生物材料的制備步驟為先在普通細胞培養(yǎng)基材上體外培養(yǎng)外源細胞并誘導外源細胞分泌基質(zhì)，再脫細胞處理；所述外源細胞為骨髓間充質(zhì)干細胞。

2.?根據(jù)權(quán)利要求1所述褪黑素協(xié)同細胞外基質(zhì)生物材料在制備促進間充質(zhì)干細胞成骨分化藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述間充質(zhì)干細胞為骨髓間充質(zhì)干細胞。

3.?根據(jù)權(quán)利要求1或2所述褪黑素協(xié)同細胞外基質(zhì)生物材料在制備促進間充質(zhì)干細胞成骨分化藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述骨髓間充質(zhì)干細胞取自人源、豬源、鼠源或兔源。

4.?根據(jù)權(quán)利要求1或2所述褪黑素協(xié)同細胞外基質(zhì)生物材料在制備促進間充質(zhì)干細胞成骨分化藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述誘導外源細胞分泌基質(zhì)時使用的誘導培養(yǎng)液組成為：培養(yǎng)基α-MEM?80~90%體積比，胎牛血清10~20%體積比，抗生素10~200?U/mL，腺嘌呤0.2~0.25?mM，刺激因子組分；所述所述刺激因子組分由抗壞血酸10~100μg/mL，脯氨酸20~60μg/mL，地塞米松100nM~1μM中的一種或幾種組成。

5.?根據(jù)權(quán)利要求1或2所述褪黑素協(xié)同細胞外基質(zhì)生物材料在制備促進間充質(zhì)干細胞成骨分化藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述脫細胞處理為先加入含有氨水和Triton?X-100的脫細胞處理液處理，再加入脫氧核糖核酸酶處理，所述脫細胞處理液由pH7.4的磷酸鹽緩沖液配制，含有Triton?X-100?1~5%體積比和氨水0.8~5%體積比，所述脫氧核糖核酸酶溶液由pH7.4的磷酸鹽緩沖液配制，含有500~800?U/mL脫氧核糖核酸酶。

6.?褪黑素協(xié)同細胞外基質(zhì)生物材料在制備治療骨疾病藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述細胞外基質(zhì)生物材料的制備步驟為先在普通細胞培養(yǎng)基材上體外培養(yǎng)外源細胞并誘導外源細胞分泌基質(zhì)，再脫細胞處理；所述外源細胞為骨髓間充質(zhì)干細胞。

7.?根據(jù)權(quán)利要求6所述褪黑素協(xié)同細胞外基質(zhì)生物材料在制備治療骨疾病藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述骨髓間充質(zhì)干細胞取自人源、豬源、鼠源或兔源。

8.?根據(jù)權(quán)利要求6或7所述褪黑素協(xié)同細胞外基質(zhì)生物材料在制備治療骨疾病藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述骨疾病為骨關(guān)節(jié)炎癥、骨缺損或骨創(chuàng)傷。

9.?根據(jù)權(quán)利要求6或7所述褪黑素協(xié)同細胞外基質(zhì)生物材料在制備治療骨疾病藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述誘導外源細胞分泌基質(zhì)時使用的誘導培養(yǎng)液組成為：培養(yǎng)基α-MEM?80~90%體積比，胎牛血清10~20%體積比，抗生素10~200?U/mL，腺嘌呤0.2~0.25?mM，刺激因子組分；所述所述刺激因子組分由抗壞血酸10~100μg/mL，脯氨酸20~60μg/mL，地塞米松100nM~1μM中的一種或幾種組成。

10.?根據(jù)權(quán)利要求6或7所述褪黑素協(xié)同細胞外基質(zhì)生物材料在制備治療骨疾病藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述脫細胞處理為先加入含有氨水和Triton?X-100的脫細胞處理液處理，再加入脫氧核糖核酸酶處理，所述脫細胞處理液由pH7.4的磷酸鹽緩沖液配制，含有Triton?X-100?1~5%體積比和氨水0.8~5%體積比，所述脫氧核糖核酸酶溶液由pH7.4的磷酸鹽緩沖液配制，含有500~800?U/mL脫氧核糖核酸酶。