[發明專利]一種復合微生物菌劑及其在煙葉生產方面的應用

有效

• 申請號: 201310747674.3
• 申請日: 2013-12-31
• 公開（公告）號: CN103805538B
• 公開（公告）日: 2017-03-29
• 發明（設計）人: 李敏;劉永強;邵蘭軍;謝曉斌;余鏡賢;李宙文;黃景崇;冀浩;高衛鍇;杜秉海;丁延芹
• 申請（專利權）人: 廣東中煙工業有限責任公司;山東農業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/16;A01N63/04;A01P21/00;C12R1/01;C12R1/865
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司44102
• 代理人: 任重

1.一種復合微生物菌劑，其特征在于，是采用菌株P22的培養液和酵母菌培養液混合制備得到，所述菌株P22的培養液和酵母菌培養液中菌株濃度均大于2億/mL，菌株P22的培養液和酵母菌培養液中混配后混合菌劑的濃度≥2億/mL；

所述菌株P22的培養液和酵母菌培養液按照體積比為1:1～3:1；

所述菌株P22保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏日期為2010年8月23日，種名：缺陷短波單胞菌（Brevundimonas?diminuta），保藏號為CGMCC?NO.4122。

2.根據權利要求1所述的復合微生物菌劑，其特征在于，所述菌株P22的培養液和酵母菌培養液按照體積比為1:1、2:1或3:1混合；最優選2:1。

3.根據權利要求1所述的復合微生物菌劑，其特征在于，所述酵母菌為釀酒酵母。

4.權利要求1～3任一項所述復合微生物菌劑在促進煙葉生產和/或提高煙株抗病抗逆性的生物防治方面的應用。

5.根據權利要求4所述的應用，其特征在于，是將所述菌劑與水按照1:200的體積比混合后噴施于煙葉葉面。

6.一種權利要求1～3任一項所述復合微生物菌劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1.分別發酵擴大培養菌株P22和酵母菌，使每個菌種的培養液最終菌濃度≥2億/mL，得到菌株P22培養液和酵母菌培養液；

S2.將菌株P22培養液和酵母菌培養液按比例比例混配得到復合微生物菌劑。

7.根據權利要求6所述復合微生物菌劑的制備方法，其特征在于，S1所述的發酵擴大培養包括以下步驟：

S11.菌種活化：分別從斜面保藏管中取1環菌株P22、酵母菌的菌苔至液體培養基中培養；

S12.搖瓶培養：汲取S1培養所得菌液接種于搖瓶中培養；

S13.發酵罐培養：S2培養好的搖瓶接種到發酵罐擴大培養，使最終菌體濃度≥2億/mL。

8.根據權利要求7所述復合微生物菌劑的制備方法，其特征在于，S11所述液體培養基、S12所述搖瓶培養的培養基、S13所述發酵罐培養的培養基的制備方法為：25重量份豆芽加75重量份去離子水煮沸20分鐘，過濾除渣，補足體積，加入5重量份葡萄糖溶解混勻，調整pH值至7.0，121℃滅菌30分鐘，即得；

S11所述的斜面培養基的制備方法為：25重量份豆芽加75重量份去離子水煮沸20分鐘，過濾除渣，補足體積，加入5重量份葡萄糖、2重量份瓊脂粉溶解混勻，調整pH值至7.0，121℃滅菌30分鐘，即得。

9.根據權利要求6所述復合微生物菌劑的制備方法，其特征在于，還包括以下步驟：

S14.活菌數測定：滅菌的固體培養基趁熱倒到無菌的培養皿內冷卻制成平板，涂布均勻，培養，取菌落數在30～300的平板作為計數平板，計算菌液活菌數；

所述固體培養基的制備方法為：25重量份豆芽加75重量份去離子水煮沸20分鐘，過濾除渣，補足體積，加入5重量份葡萄糖、2重量份瓊脂粉溶解混勻，調整pH值至7.0，121℃滅菌30分鐘，即得。

10.權利要求6所述制備方法制備得到的復合微生物菌劑在促進煙葉生產和/或提高煙株抗病抗逆性的生物防治方面的應用。