[發明專利]用于敲低ERR表達的小分子干擾RNA、重組載體及其應用

無效

• 申請號: 201310746591.2
• 申請日: 2013-12-30
• 公開（公告）號: CN103725682A
• 公開（公告）日: 2014-04-16
• 發明（設計）人: 劉慶禮;雷楊;管敏;潘浩波
• 申請（專利權）人: 深圳先進技術研究院
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/85;C12N15/867;A61K48/00;A61P35/00;A61P19/10
• 代理公司: 廣州三環專利代理有限公司 44202
• 代理人: 郝傳鑫;熊永強

技術領域

本發明涉及分子生物學、基因工程技術以及生物醫藥領域，具體涉及一種用于敲低ERR表達的小分子干擾RNA、重組載體及其應用。

背景技術

雌激素相關受體（ERR）不與雌激素結合，研究表明其與骨質疏松癥和乳腺癌的發生有關，同時還在糖脂代謝途徑中起重要作用。

RNA干擾（RNA?interference,RNAi）可誘發的基因沉默。當細胞中導入與內源性mRNA編碼區同源的雙鏈RNA時，該mRNA發生降解而導致基因表達沉默。目前，應用RNA干擾技術對ERR（雌激素相關受體的信使RNA）進行基因沉默的方法主要有真核表達載體構建法和腺病毒載體構建法。但是，真核表達載體構建法轉染效率極低，而且只能轉染極少數的細胞種類，應用范圍受到很大限制。利用腺病毒載體構建的載體雖然宿主廣泛、感染效率高，但其不能有效整合、目的基因表達時問短等缺點限制了其在ERR轉基因研究中的應用。

因此，有必要提供一種采用RNA干擾技術對ERR進行基因沉默的方法。

發明內容

為解決上述問題，本發明提供了一種用于沉默ERR的表達的小分子干擾RNA、shRNA、shRNA的編碼DNA、重組載體、重組慢病毒及應用。

本發明提供的小分子干擾RNA能直接特異性靶向ERR的mRNA，并導致ERR的mRNA降解，產生基因沉默效應；本發明提供的shRNA、shRNA的編碼DNA、重組載體、重組慢病毒或藥物組合物能間接地沉默ERR的表達。

本發明涉及的英文縮寫及其中文釋義如下：

ERR：雌激素相關受體；

ERR-shRNA：具有靶向雌激素相關受體信使RNA的短發夾RNA；

mRNA：信使RNA；siRNA：小分子干擾RNA；shRNA：短發夾RNA；

第一方面，本發明提供了一種小分子干擾RNA，所述小分子干擾RNA具有與翻譯雌激素相關受體蛋白的信使RNA互補的核苷酸序列，長度為19～29bp。

優選地，本發明第一方面提供了的一種小分子干擾RNA，所述小分子干擾RNA具有與翻譯雌激素相關受體蛋白的信使RNA互補的核苷酸序列，長度為19～29bp。

優選地，所述小分子干擾RNA的長度為21～27bp。

優選地，所述小分子干擾RNA的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:1或SEQ?ID?NO:2所示。

優選地，所述雌激素相關受體蛋白基因為小鼠雌激素相關受體α基因。

第二方面，本發明提供了一種shRNA，所述shRNA具有如第一方面所述的小分子干擾RNA的正義鏈或反義鏈的核苷酸序列。

優選地，本發明第二方面提供了的一種shRNA，為具有莖環結構的單鏈RNA，所述shRNA具有小分子干擾RNA的正義鏈或反義鏈的核苷酸序列，其中，所述小分子干擾RNA具有與翻譯雌激素相關受體蛋白的信使RNA互補的核苷酸序列，長度為19～27bp。

優選地，所述雌激素相關受體蛋白基因為小鼠雌激素相關受體α基因，所述小鼠雌激素相關受體α基因的Genebank登錄號為26379；。

優選地，所述小分子干擾RNA的長度為21～27bp。

優選地，所述小分子干擾RNA的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:1或SEQ?ID?NO:2所示。

第三方面，本發明提供了一種shRNA的編碼DNA，所述shRNA具有如第一方面所述的小分子干擾RNA的正義鏈或反義鏈的核苷酸序列。

優選地，本發明第三方面提供了的一種shRNA的編碼DNA，所述shRNA具有小分子干擾RNA的正義鏈或反義鏈的核苷酸序列，其中，所述小分子干擾RNA具有與翻譯雌激素相關受體蛋白的信使RNA互補的核苷酸序列，長度為19～27bp。

優選地，所述雌激素相關受體蛋白基因為小鼠雌激素相關受體α基因。

優選地，所述小分子干擾RNA的長度為21～27bp。

優選地，所述小分子干擾RNA的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:1或SEQ?ID?NO:2所示。

優選地，所述編碼shRNA的DNA的含有SEQ?ID?NO:3或SEQ?ID?NO:4所示的核苷酸序列。

具體地，在此優選條件下，所述SEQ?ID?NO:3（5’-3’）為：

CCGCTAGTGCTCAGCTCTCTACCCAATTC?AAGAGATTGGGTAGAGAGCTGAGCACTAGCTTTTTT；

所述SEQ?ID?NO:4（5’-3’）為：