[發明專利]一種直接肉湯獸藥敏感試驗方法

無效

• 申請號: 201310745303.1
• 申請日: 2013-12-27
• 公開（公告）號: CN103740801A
• 公開（公告）日: 2014-04-23
• 發明（設計）人: 劉躍生;姚寧屏
• 申請（專利權）人: 嘉興職業技術學院
• 主分類號: C12Q1/18
• 分類號: C12Q1/18
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 龔燮英

1.一種直接肉湯獸藥敏感試驗方法，其特征在于，所述的直接肉湯獸藥敏感試驗方法包括以下步驟：

步驟一、制備藥敏培養基；

步驟二、用注射用水分別配制獸藥的液體制劑和固體制劑；

步驟三、對發生疫情的動物進行病料采集和樣品制備；

步驟四、在藥敏試驗管加入中MH肉湯和獸藥制劑，再在各藥敏試驗管中加入無菌采集發病動物待檢樣品，充分混勻，進行獸藥敏感試驗。

2.如權利要求1所述的直接肉湯獸藥敏感試驗方法，其特征在于，步驟一所述的制備藥敏培養基的方法具體步驟如下：

選擇杭州天和微生物試劑有限公司生產的《細菌干粉培養基》即MH肉湯，產品執行標準：YZB/浙0660-2009，培養基成分符合GB4789-28的要求，外觀為細粉末狀，產品批號在有效期內，pH7.4；稱取干粉培養基36g，加入到1000ml蒸餾水中，煮沸充分溶解，補足水分，過濾、分裝到小試管，每管5ml；121℃滅菌30min后，再進行37℃20h培養，無菌檢驗合格的放入4℃冰箱備用。

3.如權利要求1所述的直接肉湯獸藥敏感試驗方法，其特征在于，步驟二所述的液體制劑的配制的具體方法如下：

試驗選用液體獸藥制劑的治療劑量為0.2ml/kgBW，以MH肉湯培養液5ml代表1kgBW，則在5ml?MH肉湯培養液中加入試驗獸藥原液1ul；操作時，用微量移液器先在無菌小試管中加入900ul注射用水，再吸取100ul試驗獸藥原液，放入充分混勻，再吸取10ul藥液放入MH肉湯培養液5ml的試驗管中。

4.如權利要求1所述的直接肉湯獸藥敏感試驗方法，其特征在于，步驟二所述的固體制劑的配制的具體方法如下：

采用頭孢噻呋鈉粉針，治療劑量是3mg/kgBW，在5ml?MH肉湯培養液中加入15ug頭孢噻呋鈉粉針，操作時，先在0.5g/瓶中加入10ml注射用水，充分搖勻，用微量移液器準確吸取30ul的藥液，放入含有970ul注射用水的無菌小試管中，充分搖勻，再吸取10ul的藥液放入MH肉湯培養液5ml即可。

5.如權利要求1所述的直接肉湯獸藥敏感試驗方法，其特征在于，步驟三所述的對發生疫情的動物進行病料采集和樣品制備具體方法如下：

對處于流行早期的典型發病動物，無菌采集2～3份全血，各2～4ml，再將分離的血清混合后作為待檢樣品；對于流行中期的發病動物群，撲殺典型發病動物2～3頭，無菌采集心包滲出液、或關節液、胸腔積液，每份病料采集1～2ml，混合后作為待檢樣品。

6.如權利要求1所述的直接肉湯獸藥敏感試驗方法，其特征在于，步驟四所述的進行獸藥敏感試驗的具體方法如下：

每個藥敏試驗管及對照管中MH肉湯為5ml，每種獸藥按設定的劑量配制后，分別加入2支藥敏試驗管10ul，以便重復對照；再在各藥敏試驗管中加入無菌采集發病動物待檢樣品10ul，充分混勻；同時設立對照組各2管，設不加獸藥及待檢樣品的MH肉湯空白對照管、不加獸藥而加發病動物待檢樣品10ul的MH肉湯細菌對照管。經35℃±2℃培養18小時，對比分析結果，篩選敏感藥物，得出待檢樣品中細菌對各種獸藥的敏感程度。

7.如權利要求1所述的直接肉湯獸藥敏感試驗方法，其特征在于，所述的獸藥敏感試驗管設高度敏感++++、敏感+++、中度敏感++、低度敏感+、不敏感-，五個級別標準；

“++++”：100%液體完全透明，無細菌生長，管底無凝集沉淀物；

“+++”：75%液體透明，有少量細菌生長，略呈混濁，管底有極少量凝集沉淀物；

“++”：50%液體透明，有部分細菌生長，中等程度混濁，管底有少量凝集沉淀物；

“+”：25%液體透明，有多量細菌生長，明顯混濁，管底有較多凝集沉淀物；

“-”：100%液體不透明，有大量細菌生長，有明顯凝集沉淀物，振蕩呈均勻混濁。

8.如權利要求1所述的直接肉湯獸藥敏感試驗方法，其特征在于，設定的MH肉湯空白對照管和MH肉湯細菌對照管，達到以下標準：

MH肉湯空白對照管：100%液體完全透明，應無細菌生長，管底無凝集沉淀物，以“++++”標記；

MH肉湯細菌對照：100%液體不透明，有大量細菌生長，有明顯凝集沉淀物，振蕩時呈均勻混濁，以“-”標記。