[發明專利]一種副豬嗜血桿菌高密度發酵培養基

有效

• 申請號: 201310742743.1
• 申請日: 2013-12-30
• 公開（公告）號: CN103667160A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發明（設計）人: 陳申秒;徐海軍;馬景霞;吳雪莉;王楠
• 申請（專利權）人: 山東濱州博萊威生物技術有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/21
• 代理公司: 濟南舜源專利事務所有限公司 37205
• 代理人: 徐槐

技術領域

本發明涉及微生物培養基技術領域，更具體的講是一種副豬嗜血桿菌高密度發酵培養基的制備方法。

背景技術

豬副嗜血桿菌病又稱多發性纖維素性漿膜炎和關節炎，也稱格拉澤氏病。是由豬副嗜血桿菌引起。這種細菌在環境中普遍存在，世界各地都有，甚至是健康的豬群當中也能發現。對于采用無特定病原或用藥早起斷奶技術而沒有豬副嗜血桿菌污染的豬群，初次感染到這種細菌時后果會相當嚴重。

而副豬嗜血桿菌：屬革蘭氏陰性短小桿菌，形態多變，有15個以上血清型，其中血清型5、4、13最為常見(占70%以上)。該菌生長時嚴格需要煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD或V因子)，不需要X因子(血紅素或其它卟啉類物質)，?在血液培養基和巧克力培養基上生長，?菌落小而透明，在血液培養基上無溶血現象；在葡萄球菌菌臺周圍生長良好，形成衛星現象。一般條件下難以分離和培養，尤其是應用抗生素治療過病豬的病料，因而給本病的診斷帶來困難；據報道：豬副嗜血桿菌的真實發病率可能為實際確診的10倍之多。

目前針對副豬嗜血桿菌的培養存在諸多問題，比如營養需求高，pH要求嚴格，培養密度低等，而目前常用的培養基為TSB培養基，但是并不能滿足大規模的培養，這是現有技術中的不足。

發明內容

本發明的發明目的在于針對現有技術中的不足，提供一種副豬嗜血桿菌高密度發酵培養基，該培養基通過補充各種微生物所需營養成分，并通過碳酸鈣有效控制培養基中pH，并通過谷氨酰胺提供碳源以及小部分氮，有利于副豬嗜血桿菌的快速成長。

本發明是通過以下技術方案實現的：

一種副豬嗜血桿菌高密度發酵培養基，由下述組分及配比，按照重量/體積計，谷氨酰胺2-6g/L、酵母膏15-35?g/L、氯化鈉5-10?g/L、碳酸鈣0.01-0.05?g/L、硫酸鎂0.01-0.05?g/L、胰蛋白胨1-10g/L、磷酸氫二鉀0.5-10?g/L，按體積比計：0.001-0.01NAD和10-20%的牛血清，余量為水，滅菌前培養基的PH為7.0-7.2。

優選的，上述培養基由下述組分及配比，按照重量/體積計，谷氨酰胺3-5g/L、酵母膏20-30?g/L、氯化鈉6-8?g/L、碳酸鈣0.01-0.02?g/L、硫酸鎂0.01-0.02?g/L、胰蛋白胨2-8g/L、磷酸氫二鉀1.3-8.7?g/L，按體積比計：0.005-0.008%NAD和12-18%的牛血清，余量為水，滅菌前培養基的PH為7.0-7.2。

優選的，上述培養基由下述組分及配比，按照重量/體積計，谷氨酰胺4g/L、酵母膏25?g/L、氯化鈉7g/L、碳酸鈣0.015?g/L、硫酸鎂0.015g/L、胰蛋白胨5g/L、磷酸氫二鉀5.5g/L，按體積比計：0.006%NAD和16%的牛血清，余量為水，滅菌前培養基的PH為7.0-7.2。

上述的一種副豬嗜血桿菌高密度發酵培養基的制備方法，包括如下步驟：

(1)取酵母膏15-35?g/L、氯化鈉5-10?g/L、碳酸鈣0.01-0.05?g/L、硫酸鎂0.01-0.05?g/L、胰蛋白胨1-10g/L、磷酸氫二鉀0.5-10?g/L用蒸餾水定容至1000ml，調節pH為7.0-7.2，在120℃高溫蒸汽下滅菌20-30min;

(2)取谷氨酰胺2-6g/L與0.001-0.01NAD和10-20%的牛血清混合后與100℃下滅菌30min;

(3)將步驟（1）和步驟（2）所得滅菌后溶液混合既得。

本發明的有益效果是：該培養基通過補充各種微生物所需營養成分，并通過碳酸鈣有效控制培養基中pH，并通過谷氨酰胺提供碳源以及小部分氮，有利于副豬嗜血桿菌的快速成長。

附圖說明

圖1為實施例3副豬嗜血桿菌生長曲線。

具體實施方式

下面結合附圖和具體實施例對本發明做進一步說明，以便本領域技術人員可以更好的了解本發明，但并不因此限制本發明。

實施例1

一種副豬嗜血桿菌高密度發酵培養基，由下述組分及配比，按照重量/體積計，谷氨酰胺2g/L、酵母膏15g/L、氯化鈉5?g/L、碳酸鈣0.01g/L、硫酸鎂0.01g/L、胰蛋白胨1g/L、磷酸氫二鉀0.5g/L，按體積比計：0.001NAD和10%的牛血清，余量為水，滅菌前培養基的PH為7.0。

實施例2