[發(fā)明專利]杈戴氏霉真菌在降解氯酚類化合物中的應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310742281.3
• 申請日: 2013-12-30
• 公開（公告）號: CN103816637A
• 公開（公告）日: 2014-05-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 韓燕峰;趙丹;張延威;初華麗;鄒曉;梁宗琦
• 申請（專利權(quán)）人: 貴州大學(xué)
• 主分類號: A62D3/02
• 分類號: A62D3/02;A62D101/22;A62D101/28
• 代理公司: 貴陽東圣專利商標事務(wù)有限公司 52002
• 代理人: 袁慶云

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及杈戴氏霉真菌在降解氯酚類化合物中的應(yīng)用。

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背景技術(shù)

酚類物質(zhì)是一類非常重要的工業(yè)有機化合物，被廣泛應(yīng)用于許多商品如染料、顏料、防腐劑、除草劑、殺蟲劑和殺菌劑等。由于酚類化合物具有不同程度的毒性，因此生產(chǎn)上述物質(zhì)時所排放的工業(yè)廢水是一種對環(huán)境和人類健康都會造成嚴重危害的污染物。

目前報道的降解酚類廢水的方法有臭氧法、絮凝法、吸附法、溶劑萃取法、離子交換法以及超聲波催化降解法等。但上述方法普遍存在成本高、操作繁瑣等缺點，因而限制了它們在實際生產(chǎn)中的進一步應(yīng)用。

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發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服上述缺點而提供一種具有酶適用于較寬的pH值和溫度范圍，對環(huán)境友好，過程控制簡單方便的杈戴氏霉真菌在降解氯酚類化合物中的應(yīng)用。

以下以4-氯苯酚作為氯酚類化合物的模型物，將用杈戴氏霉GZUIFR-H104.1發(fā)酵制得的漆酶粗酶液對4-氯苯酚（即：4-CP）的降解實驗及結(jié)果來說明其在降解氯酚類化合物中的應(yīng)用，具體步驟如下：

1）杈戴氏霉GZUIFR-H104.1粗酶液的制備

、孢子液的制備：取4℃保藏菌株斜面，用接種環(huán)挑取少量菌絲，采用劃線法將其接種于PDA固體培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。5d后發(fā)現(xiàn)所接微生物已大量擴增，用滅菌的5‰Tween-80輕輕洗出平板表面上的分生孢子，并在無菌條件下用16層紗布過濾，所得孢子懸浮液以血球計數(shù)器計數(shù)后置于4℃冰箱保存；

b、粗酶液的提取：移取1ml濃度為1×10⁷/mL的孢子液至300ml三角燒瓶中（內(nèi)裝80ml產(chǎn)酶培養(yǎng)液），于40℃，120rpm搖床上培養(yǎng)；7d后將發(fā)酵液于6000rpm下離心8min，取上清夜即得；

（2）杈戴氏霉GZUIFR-H104.1漆酶粗酶液催化降解酚類廢水的實驗

a、酚含量的測定：采用4-氨基安替比林直接分光光度法

酚標準使用液的配制：準確稱取新蒸餾182~184℃的苯酚約1g，溶入水中移入1000ml容量瓶，加水稀釋至刻度。

標準曲線的繪制：于一組50ml比色管中分別加入0ml、0.50ml、1.00ml、1.50ml、2.00ml、2.50ml、5.00ml和10.00ml的酚標準使用液，加蒸餾水至50ml；加入0.5ml緩沖溶液，1ml?2%的4-氨基安替比林溶液混勻，加入1ml濃度為80mg/L的鐵氰化鉀溶液顯色，混勻，放置10min；以試劑空白為參比，在510nm波長處，用10mm比色皿測量吸光值；得到標準曲線公式為：y=0.49x-0.5,?R²=0.9997.?x表示吸光值，y表示標準苯酚含量。

待測水樣的預(yù)蒸餾：250ml水樣于蒸餾瓶中，加入2滴甲基橙指示劑，用（1+9）磷酸調(diào)節(jié)水樣pH至溶液至紅橙色，加入10%（質(zhì)量濃度）硫酸銅（CuSO₄℃5H₂O）5ml，加入數(shù)粒玻璃珠，加熱蒸餾，用250ml量筒收集餾出液；待餾出液達225ml后，停止蒸餾。蒸餾瓶內(nèi)液面靜止后，加入25ml水，繼續(xù)蒸餾至餾出液為250ml為止；

水樣的測定：取50ml待測水樣于50ml比色管中，加入0.5ml緩沖溶液，1ml的2%的4-氨基安替比林溶液混勻，再加入1ml濃度為80mg/L鐵氰化鉀顯色，放置10min；以試劑空白為參比，于510nm波長處，用10mm比色皿測量吸光值。

酚含量經(jīng)下式計算得到：

酚（mg/L）=????????????????????????????????????????????????

m─由公式查得的相當于酚的量（相當于上面標準曲線公式中y的值），mg

V₁─水樣蒸餾時餾出液的體積，ml

V₂─測定時所取的體積，ml

V─水樣蒸餾時所取的體積，ml

b、粗酶液催化降解4-CP酚類廢水

分別測定了不同時間、不同溫度、不同初始4-CP酚濃度和不同pH條件下（表1），粗酶液對酚類物質(zhì)以4-CP為例的降解效果，所有降解實驗均是在總體積為50ml的由0.01mol/L的苯酚、漆酶粗酶液和0.2mol/L的檸檬酸緩沖溶液組成的反應(yīng)體系中進行；

酚的降解率（%）=[（初始濃度—降解后濃度）/初始濃度]×100