[發明專利]杈戴氏霉真菌在降解氯酚類化合物中的應用

在審

• 申請號: 201310742281.3
• 申請日: 2013-12-30
• 公開（公告）號: CN103816637A
• 公開（公告）日: 2014-05-28
• 發明（設計）人: 韓燕峰;趙丹;張延威;初華麗;鄒曉;梁宗琦
• 申請（專利權）人: 貴州大學
• 主分類號: A62D3/02
• 分類號: A62D3/02;A62D101/22;A62D101/28
• 代理公司: 貴陽東圣專利商標事務有限公司 52002
• 代理人: 袁慶云

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其涉及杈戴氏霉真菌在降解氯酚類化合物中的應用。

?

背景技術

酚類物質是一類非常重要的工業有機化合物，被廣泛應用于許多商品如染料、顏料、防腐劑、除草劑、殺蟲劑和殺菌劑等。由于酚類化合物具有不同程度的毒性，因此生產上述物質時所排放的工業廢水是一種對環境和人類健康都會造成嚴重危害的污染物。

目前報道的降解酚類廢水的方法有臭氧法、絮凝法、吸附法、溶劑萃取法、離子交換法以及超聲波催化降解法等。但上述方法普遍存在成本高、操作繁瑣等缺點，因而限制了它們在實際生產中的進一步應用。

??

發明內容

本發明的目的在于克服上述缺點而提供一種具有酶適用于較寬的pH值和溫度范圍，對環境友好，過程控制簡單方便的杈戴氏霉真菌在降解氯酚類化合物中的應用。

以下以4-氯苯酚作為氯酚類化合物的模型物，將用杈戴氏霉GZUIFR-H104.1發酵制得的漆酶粗酶液對4-氯苯酚（即：4-CP）的降解實驗及結果來說明其在降解氯酚類化合物中的應用，具體步驟如下：

1）杈戴氏霉GZUIFR-H104.1粗酶液的制備

、孢子液的制備：取4℃保藏菌株斜面，用接種環挑取少量菌絲，采用劃線法將其接種于PDA固體培養基上，37℃培養箱中培養。5d后發現所接微生物已大量擴增，用滅菌的5‰Tween-80輕輕洗出平板表面上的分生孢子，并在無菌條件下用16層紗布過濾，所得孢子懸浮液以血球計數器計數后置于4℃冰箱保存；

b、粗酶液的提取：移取1ml濃度為1×10⁷/mL的孢子液至300ml三角燒瓶中（內裝80ml產酶培養液），于40℃，120rpm搖床上培養；7d后將發酵液于6000rpm下離心8min，取上清夜即得；

（2）杈戴氏霉GZUIFR-H104.1漆酶粗酶液催化降解酚類廢水的實驗

a、酚含量的測定：采用4-氨基安替比林直接分光光度法

酚標準使用液的配制：準確稱取新蒸餾182~184℃的苯酚約1g，溶入水中移入1000ml容量瓶，加水稀釋至刻度。

標準曲線的繪制：于一組50ml比色管中分別加入0ml、0.50ml、1.00ml、1.50ml、2.00ml、2.50ml、5.00ml和10.00ml的酚標準使用液，加蒸餾水至50ml；加入0.5ml緩沖溶液，1ml?2%的4-氨基安替比林溶液混勻，加入1ml濃度為80mg/L的鐵氰化鉀溶液顯色，混勻，放置10min；以試劑空白為參比，在510nm波長處，用10mm比色皿測量吸光值；得到標準曲線公式為：y=0.49x-0.5,?R²=0.9997.?x表示吸光值，y表示標準苯酚含量。

待測水樣的預蒸餾：250ml水樣于蒸餾瓶中，加入2滴甲基橙指示劑，用（1+9）磷酸調節水樣pH至溶液至紅橙色，加入10%（質量濃度）硫酸銅（CuSO₄℃5H₂O）5ml，加入數粒玻璃珠，加熱蒸餾，用250ml量筒收集餾出液；待餾出液達225ml后，停止蒸餾。蒸餾瓶內液面靜止后，加入25ml水，繼續蒸餾至餾出液為250ml為止；

水樣的測定：取50ml待測水樣于50ml比色管中，加入0.5ml緩沖溶液，1ml的2%的4-氨基安替比林溶液混勻，再加入1ml濃度為80mg/L鐵氰化鉀顯色，放置10min；以試劑空白為參比，于510nm波長處，用10mm比色皿測量吸光值。

酚含量經下式計算得到：

酚（mg/L）=????????????????????????????????????????????????

m─由公式查得的相當于酚的量（相當于上面標準曲線公式中y的值），mg

V₁─水樣蒸餾時餾出液的體積，ml

V₂─測定時所取的體積，ml

V─水樣蒸餾時所取的體積，ml

b、粗酶液催化降解4-CP酚類廢水

分別測定了不同時間、不同溫度、不同初始4-CP酚濃度和不同pH條件下（表1），粗酶液對酚類物質以4-CP為例的降解效果，所有降解實驗均是在總體積為50ml的由0.01mol/L的苯酚、漆酶粗酶液和0.2mol/L的檸檬酸緩沖溶液組成的反應體系中進行；

酚的降解率（%）=[（初始濃度—降解后濃度）/初始濃度]×100