[發明專利]一種基于量子點的雙夾心免疫熒光定量檢測人Inhibin-B的試劑盒制備方法及其應用

無效

• 申請號: 201310740120.0
• 申請日: 2013-12-25
• 公開（公告）號: CN103728457A
• 公開（公告）日: 2014-04-16
• 發明（設計）人: 夏曦;胡向明;郭忠振;黎俊青
• 申請（專利權）人: 李志榮
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 陳國榮

技術領域

本發明屬于免疫診斷技術領域，涉及基于量子點的免疫熒光定量檢測，具體涉及一種基于量子點的雙夾心免疫熒光定量檢測人Inhibin-B的試劑盒及其制備和應用。

背景技術

目前臨床上國內各診療單位評估卵巢功能主要根據年齡、竇卵泡的數目（Antral?follicle?count）、濾泡刺激激素（FSH）和雌激素（E2）水平等。但上述傳統方法檢查容易受到各種因素影響而產生誤差，同時容易受到檢測者主觀判斷而產生結果偏倚；此外，上述指標的檢測受月經周期的時限制約，且其檢測數值受到月經周期的波動較大，因而無法準確給予判斷。能否尋找某一有效指標，在月經不同時期均能有效評估卵巢功能是目前婦科生殖內分泌面臨的主要問題之一。近年來，臨床上開始采用抑制素B激素作為卵巢功能評估的一項指標。抑制素B是一種由女性生長期卵泡顆粒細胞分泌的異二聚體蛋白質激素。其通過選擇性抑制卵泡刺激素（FSH）的分泌從而調節卵泡的發育。完整的抑制素B分子是一個分子量約為32KD的分子，由兩個不同的亞單位（α亞單位和β亞單位）經二硫鍵連接而成。研究表明，抑制素B水平與卵巢儲備功能呈正相關。

目前在歐美，大部分臨床診療中心已將Inhibin-B作為評估卵巢儲備的常規指標。主要所采用酶聯免疫顯色法測定（enzyme-linked?immunoassay,Elisa)。但是，酶免疫分析法靈敏度低，影響因素較多，易造成假陰性和假陽性結果。量子點（QDs）具有連續而寬的激發光光譜。其熒光可被波長小于其量子限域峰的任意光源所激發，且熒光譜峰位置可以通過改變量子點物理尺寸進行調控。這樣僅用一種波長的激發光源便可激發多種不同顏色熒光的量子點進行多元熒光檢測。有效提高了分辨率和靈敏度。因此，量子點免疫分析法遠遠優于酶免疫測定。

目前國內尚未見檢測Inhibin-B的注冊試劑盒供應，該項檢測在臨床上的研究也還未廣泛展開。且目前國外的Inhibin-B檢測試劑盒多采用的是酶聯免疫方法，但是酶免疫分析法靈敏度低，影響因素多，易造成假陰性和假陽性。而根據大量的試驗結果及臨床應用資料，從實用性、穩定性、準確性及臨床應用前景來看，量子點免疫分析法遠遠優于酶免疫測定。

發明內容

本發明的目的在于提供一種量子點免疫熒光定量檢測人抑制素B的試劑盒。

本發明的另一目的在于提供上述試劑盒在檢測卵巢儲備功能中的應用。

本發明所采取的技術方案是：

一種基于量子點的雙夾心免疫熒光定量檢測人Inhibin-B的試劑盒，該試劑盒包括Inhibin-B蛋白標準品，包被Inhibin-B特異性多克隆抗體的酶標板，CdTe量子點標記的Inhibin-B單克隆抗體。

進一步的，上述Inhibin-B蛋白標準品為原核細胞表達的重組蛋白，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。

進一步的，上述Inhibin-B特異性多克隆抗體是以原核表達的Inhibin-B重組蛋白作為免疫原合成的兔抗人Inhibin-B多克隆抗體。

進一步的，上述Inhibin-B單克隆抗體是以原核表達的Inhibin-B重組蛋白作為免疫原合成的鼠抗人Inhibin-B單克隆抗體。

進一步的，本發明試劑盒還包括：標記抗體稀釋液、洗板液、封閉液和樣品稀釋液。

本發明的有益效果是：

試劑盒中作為檢測抗體的單克隆抗體，由于采用的量子點標記法具有激發光譜寬，自發熒光弱，熒光穩定和半衰期長等特點，大大的提高了檢測的分辨率、靈敏度和特異性。

本發明的試劑盒以CdTe量子點標記鼠抗人Inhibin-B單克隆抗體作為檢測抗體，更好的去除背景信號，提高檢測的分辨率和靈敏度；且通過熒光酶標儀測量熒光強度獲得檢測結果，所發射的熒光譜峰狹窄，自發熒光弱，靈敏度高；熒光強度高，穩定時間長；克服了現有的抑制素B酶免疫檢測試劑盒靈敏度低，特異性差的現狀，提高檢測的分辨率、靈敏度及特異性，更為有效地對早期卵巢儲備功能進行檢測及風險評估。

本發明用量子點免疫分析法檢測Inhibin-B是先進而有效的方法，能夠有效的提供臨床檢測的分辨率、靈敏度及特異性，且檢測方法操作簡便，實用性強。

附圖說明

圖1為人Inhibin-B重組蛋白純化前后的western?blotting圖片；

圖2為純化后的兔抗人Inhibin-B多克隆抗體的標準曲線；

圖3為純化后的鼠抗人Inhibin-B單克隆抗體的標準曲線；

圖4為Inhibin-B量子點免疫分析檢測試劑盒的檢查區間曲線。