[發(fā)明專利]一種根管-根尖周復(fù)合體體外模型

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310737665.6
• 申請(qǐng)日: 2013-12-27
• 公開（公告）號(hào): CN103710256A
• 公開（公告）日: 2014-04-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鐘曉波;何斌;王容;駱書美;趙潔;曹祥莉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 重慶醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院
• 主分類號(hào): C12M1/00
• 分類號(hào): C12M1/00;C12Q1/02
• 代理公司: 重慶市恒信知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 50102
• 代理人: 劉小紅

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于根管和根尖周模型領(lǐng)域；更具體地，本發(fā)明涉及一種根管-根尖周復(fù)合體體外模型。

背景技術(shù)

細(xì)菌是根尖周炎的主要致病因素。有學(xué)者認(rèn)為根管內(nèi)的細(xì)菌以生物膜的形式存在，在未接受治療時(shí)，細(xì)菌不易穿出根尖孔，而是其毒力因子穿出根尖孔導(dǎo)致的根尖周炎。也有學(xué)者提出在環(huán)境因素的誘導(dǎo)下，根管生物膜中部分浮游菌可穿過根尖孔和牙本質(zhì)小管侵入根尖周組織形成根尖生物膜。除了細(xì)菌對(duì)根尖周組織的直接入侵外，根管內(nèi)細(xì)菌的毒力因子如內(nèi)毒素等也可進(jìn)入根尖周組織引起根尖周組織的破壞。綜合目前的研究，感染根管內(nèi)的微生物可以進(jìn)入根尖周形成根尖生物膜。但形成根尖生物膜的微生物是隨機(jī)的自主的進(jìn)入，還是受到諸如根管治療等的刺激后才進(jìn)入根尖周尚無定論。換言之，在未治療的情況下，感染根管生物膜導(dǎo)致根尖周病變是細(xì)菌進(jìn)入根尖周組織分泌毒力因子導(dǎo)致的為主，還是根管內(nèi)細(xì)菌的毒力因子進(jìn)入根尖周引起的為主，抑或二者共同作用還不明了，亦無相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。

從病理學(xué)的角度可以把根管與根尖周看作一個(gè)整體，即：在牙周健康的情況下，根尖周病原刺激物主要來源于根管，而根管一旦受到感染，幾乎不可避免的會(huì)導(dǎo)致根尖周的炎癥。

許多研究涉及到根尖周炎模型的建立。Perters利用牛牙建立了感染根管模型[1]。楊衛(wèi)東[2]則用Beagle犬前牙建立感染根管模型，觀察了超聲治療與常規(guī)治療對(duì)根管內(nèi)細(xì)菌的影響。郭慧杰、孫拓祺等[3,4]分別用離體雙尖牙建立了體外糞腸球菌感染根管模型，用于觀察感染根管糞腸球菌定植情況，以及評(píng)價(jià)激光對(duì)生物膜的作用情況。莊沛林等[5]則將離體牙制成牙本質(zhì)片，在其上建立糞腸球菌感染根管模型，用以研究無機(jī)納米抗菌劑對(duì)生物膜的作用。劉桂香[6]等用離體上頜前磨牙檢測(cè)了超聲沖洗對(duì)根管內(nèi)毒素的滅活和清除效果。以上研究成果表明人工建立感染根管模型是成立的。

目前對(duì)感染根管及根尖周的感染（病變）只能分開研究。對(duì)感染根管的研究主要有以下幾種方法：（1）經(jīng)典方法是根管內(nèi)插入紙尖取材，對(duì)細(xì)菌及其毒素進(jìn)行研究；（2）在離體牙根管內(nèi)接種細(xì)菌進(jìn)行研究；（3）將牙本質(zhì)制作成磨片，接種細(xì)菌進(jìn)行研究；（4）動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：利用狗等動(dòng)物制作感染根管。對(duì)根尖周感染（病變）的研究為拔除患牙對(duì)根尖周取材后進(jìn)行研究或者通過根尖外科手術(shù)取材進(jìn)行研究。

基于此，本發(fā)明提出了根管-根尖周復(fù)合體概念，并建立了根管-根尖周復(fù)合體體外模型。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種根管-根尖周復(fù)合體體外模型。該復(fù)合體體外模型可以用于研究感染根管形成根尖周炎的途徑和影響因素。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取如下措施：

本發(fā)明所述根管-根尖周復(fù)合體體外模型，由如下步驟建立而成：

（1）取因正畸被拔除掉的單根前磨牙，用刮匙和超聲潔治器去除牙根表面的軟組織和牙石，置于2.5～3.0mol/L的甲醛溶液中，20～30℃保存?zhèn)溆茫秒x體牙（1）；

（2）取玻璃瓶，玻璃瓶由瓶身（2）和橡皮塞（3）組成，根據(jù)離體牙頸部的直徑在橡皮塞（3）中心挖孔，將離體牙（1）經(jīng)孔套入橡皮塞（3）中，離體牙（1）和橡皮塞（3）的接口處采用光固化的流動(dòng)樹脂封閉，將瓶身（2）和固定有離體牙（1）的橡皮塞（3）在溫度110～125℃、壓力10～20MPa下進(jìn)行滅菌處理，直至滅菌合格；

（3）在超凈工作臺(tái)中，向經(jīng)滅菌處理合格的瓶身（2）中注入無菌LB固體培養(yǎng)基（4）；然后將固定有離體牙（1）的橡皮塞（3）用無菌封口膠與瓶身（2）緊密相連，所述LB固體培養(yǎng)基（4）剛好到達(dá)離體牙（1）牙根的三分之一處；在離體牙（1）和橡皮塞（3）的接口處涂布兩層指甲油，即得根管-根尖周復(fù)合體體外模型。

在上述根管-根尖周復(fù)合體體外模型的建立中，所述步驟（3）中還包括待LB固體培養(yǎng)基（4）凝固后，將與離體牙（1）牙根接觸的一個(gè)面的培養(yǎng)基（4）挖除部分，將帶軟管（5）的針頭（6）穿過固定有離體牙（1）的橡皮塞（3），使針頭（6）到達(dá)到培養(yǎng)基（4）被挖除的部分，采用橡皮塞（7）封閉軟管（5）的開口，其中所述帶軟管（5）的針頭（6）和橡皮塞（7）使用之前在溫度110～125℃、壓力10～20MPa下進(jìn)行滅菌處理，直至滅菌合格；在針頭（6）和橡皮塞（3）的接口處涂布兩層指甲油。所述帶軟管（5）的針頭（6）可以在復(fù)合體體外模型建立后，方便外界向LB固體培養(yǎng)基（4）中添加藥物，觀察根尖周抗菌物質(zhì)（免疫物質(zhì)）對(duì)感染根管向根尖周入侵的影響。