[發(fā)明專利]一種固定化酶的制備方法及其在京尼平苷轉(zhuǎn)化中的應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310737625.1
• 申請日: 2013-12-27
• 公開（公告）號: CN103695409A
• 公開（公告）日: 2014-04-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 貢國鴻;鄭之明;劉會;王麗;王鵬;趙根海;吳躍進
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院合肥物質(zhì)科學(xué)研究院
• 主分類號: C12N11/10
• 分類號: C12N11/10;C12P17/06
• 代理公司: 安徽匯樸律師事務(wù)所 34116
• 代理人: 胡敏

1.一種固定化酶的制備方法，其特征在于，包括步驟：多糖海藻酸鈉與京尼平交聯(lián)；加入β-葡萄糖苷酶聚合獲得聚合液；將所述聚合液滴入CaCl₂溶液成固定化小球；將所述固定化小球在MnSO₄溶液中進行金屬離子置換，形成雜化海藻酸錳固定化顆粒。?

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的固定化酶的制備方法，其特征在于，所述β-葡萄糖苷酶是利用黑曲霉，并通過微生物發(fā)酵法獲得的。?

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的固定化酶的制備方法，其特征在于，所述β-葡萄糖苷酶的獲得方法，包括步驟：種子培養(yǎng)基滅菌，接種黑曲霉孢子培養(yǎng)形成種子液；發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌后接種所述種子液，培育獲得β-葡萄糖苷酶粗酶液；將所述β-葡萄糖苷酶粗酶液以鹽析法初步純化獲得沉淀物；將所述沉淀物溶于緩沖液，透析脫鹽獲得β-葡萄糖苷酶。?

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的固定化酶的制備方法，其特征在于，所述種子培養(yǎng)基包括12g/L葡萄糖，10g/L?CaCO₃，3.0g/L?KH₂PO₄，4.0g/L?NaNO₃，2.0g/L(NH₄)₂SO₄，0.5g/L?MgSO₄·7H₂O，0.5g/L?CaCl₂，0.0075g/L?FeSO₄·7H₂O，0.0025g/L?MnSO₄·H₂O，0.002g/L?ZnSO₄,0.003g/L?CoCl₂，pH5.5–6.0。?

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的固定化酶的制備方法，其特征在于，所述發(fā)酵培養(yǎng)基包括5%玉米芯粉，4%麩皮，0.6%(NH4)₂SO₄，0.6%酵母提取物，0.6%葡萄糖。?

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的固定化酶的制備方法，其特征在于，所述β-葡萄糖苷酶粗酶液是以(NH₄)₂SO₄鹽析法進行初步純化。?

7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的固定化酶的制備方法，其特征在于，所述?沉淀物溶于磷酸鹽緩沖液，置于半透膜中透析脫鹽獲得β-葡萄糖苷酶。?

8.一種利用如權(quán)利要求1-7任意項所制備的固定化酶在京尼平苷轉(zhuǎn)化方法，其特征在于，將所述制備的雜化海藻酸錳固定化顆粒以填充床反應(yīng)器進行連續(xù)生物轉(zhuǎn)化，水解京尼平苷制備京尼平。?

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的京尼平苷轉(zhuǎn)化方法，其特征在于，所述轉(zhuǎn)化溫度為40-50℃，底物濃度1%-3%，流速0.5-1柱體積/小時。?