[發(fā)明專利]一種快速測定畜禽糞便中氟喹諾酮類藥物的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310737449.1
• 申請日: 2013-12-27
• 公開（公告）號: CN104749262B
• 公開（公告）日: 2017-01-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐永剛;宇萬太;馬強(qiáng);周樺
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院沈陽應(yīng)用生態(tài)研究所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標(biāo)代理有限公司21002
• 代理人: 馬馳

1.一種快速測定畜禽糞便中氟喹諾酮類藥物的方法，其特征在于：

1）將凍干的禽畜糞便樣品研磨，并過2mm篩后，篩下組份待用；

2）準(zhǔn)確稱取0.50-1.00g樣品置于離心管中，加入50%氯化鈣鹽酸緩沖液5-10mL，渦旋混合1分鐘，超聲提取15-30分鐘，4500r/min離心10分鐘，收集上清液；

3）殘?jiān)蒙鲜霾襟E2）的方法反復(fù)提取2-5次，合并上清液；

4）溶液過0.22μm濾膜收集透過濾膜樣品待測；

5）首先用高效液相色譜儀器對氟喹諾酮類藥物中的一種或二種以上的標(biāo)準(zhǔn)樣品分別進(jìn)行定性分析，確定其保留時(shí)間；

6）標(biāo)準(zhǔn)曲線制備：制備系列濃度的氟喹諾酮類藥物中的一種或二種以上的混合標(biāo)準(zhǔn)品工作液，標(biāo)準(zhǔn)品工作液中每種標(biāo)準(zhǔn)品的系列濃度分別為10、50、100、500、1000ng/mL，在同上步驟5）相同的色譜條件下進(jìn)行高效液相色譜測定；

以峰面積為縱坐標(biāo)，每種氟喹諾酮藥物的對應(yīng)的濃度（ng/mL）為橫坐標(biāo)建立各氟喹諾酮藥物化合物標(biāo)準(zhǔn)曲線；

7）在同上步驟5）色譜條件下，對待測樣品中的目標(biāo)物含量進(jìn)行高效液相色譜測定，根據(jù)保留時(shí)間確定目標(biāo)物種類，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線確定其含量。

2.按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：

步驟1）采集的禽畜糞便樣品首先需要凍干處理，凍干后的樣品避光保存，分析前用研缽研磨，并過2mm篩后進(jìn)行樣品前處理。

3.按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：

所述氟喹諾酮類藥物為諾氟沙星、環(huán)丙沙星、洛美沙星和恩諾沙星中的一種或二種以上。

4.按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：色譜條件：色譜柱為Kromasil?C18（5um，250×4.6mm)，于激發(fā)波長280nm、發(fā)射波長450nm處進(jìn)行檢測，流動相為甲醇-水(78.5:21.5，V/V)，流速為1.0mL·min^-1，進(jìn)樣量為20μL。

5.按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：50%氯化鈣鹽酸緩沖液：50g氯化鈣溶于100mL去離子水，用1mol濃度的鹽酸調(diào)節(jié)pH為3.0，即制備成提取液。