[發明專利]一種采用緩沖液提取硫酸軟骨素的制備方法

在審

• 申請號: 201310737268.9
• 申請日: 2013-12-26
• 公開（公告）號: CN103739742A
• 公開（公告）日: 2014-04-23
• 發明（設計）人: 李鵬;陳石良;時亞文;符紹輝;程榆茗;夏毅強;于輝;張秀民;高振宏
• 申請（專利權）人: 安徽寶迪肉類食品有限公司
• 主分類號: C08B37/08
• 分類號: C08B37/08
• 代理公司: 天津盛理知識產權代理有限公司 12209
• 代理人: 董一寧

1.一種采用緩沖液提取硫酸軟骨素的制備方法，其特征在于：包括如下步驟：

⑴軟骨預處理：采集新鮮的豬或雞的軟骨，用蒸餾水進行沖洗去掉血漬，然后加熱至100℃-120℃，加熱1-3h，保溫80-90℃，4-8h，去掉表面肉締組織；

⑵緩沖液酶解：先將水浴鍋升溫至45-60℃，將預先配置好的堿性緩沖液，以堿性緩沖液與軟骨質量比1:2-1:3混合打入酶解罐，加入相當于軟骨質量0.5-0.8%的胰蛋白酶，期間維持pH為9.0-10.0，在45-48℃，提取2.5-4.5h；然后加熱至51-53℃，加入相當于軟骨質量0.2-0.3%的硫酸軟骨素專用酶,和相當于軟骨質量0.2-0.3%的堿性蛋白酶，酶解3-5h；期間不斷的去掉上層油脂，維持pH在9.1±0.5；

⑶滅酶吸附：調pH值至7.0-7.4，然后各加入相當于軟骨質量0.5-0.8%的活性炭或高嶺土進行吸附，攪拌升溫至80-100℃；靜置20min后，采用壓濾機過濾，收集濾液；

⑷樹脂純化：在吸附罐中預先加入軟骨原料與樹脂質量比為1:3.5-1:4.5的樹脂，然后將加壓過濾后的濾液打入吸附罐，在20-40℃緩慢攪拌吸附18-24h；用清水洗滌樹脂后，棄掉濾液后加入原料與解析液質量比為1:0.6-1:0.8的解析液，在20-40℃條件下振蕩解析18-24h；

⑸醇沉脫水：調pH值至7.0，將解析后的樹脂過濾，收集濾液于醇沉罐，加入95%乙醇，使其醇沉體系的乙醇濃度為65-75%，攪拌10-20min，靜置沉淀4-6h；待抽掉上層溶液后，再次加入工業酒精進行脫水，重復1-2次；

⑹離心干燥：對上述脫水后的渾濁液用管式離心機離心，離心條件為3000-4000r/min，5-10min，然后對沉淀采用冷凍干燥，干燥條件為物料厚度2-5mm、真空壓力0.18-0.32MPa、冷凍3-4h，干燥時間12-14h、溫度為-20～-30℃，即得硫酸軟骨素精制品。

2.根據權利要求1所述的一種采用緩沖液提取硫酸軟骨素的制備方法，其特征在于：所述軟骨素樣品的指標檢測結果，包括蛋白質含量為1.6-2.0%，水分含量為2.0-8.0%，氯化物含量2.8-3.1%，澄清度檢測為0.15-0.28，比旋度為-11～-15°，pH為6.2-6.8。

3.根據權利要求1所述的一種采用緩沖液提取硫酸軟骨素的制備方法，其特征在于：所述堿性緩沖液的種類，包括pH8.6的甘氨酸-氫氧化鈉緩沖液或pH9.0的硼酸-氯化鉀緩沖液或pH10.0的硼砂-碳酸鈉緩沖液或pH10.0的氨－氯化銨緩沖液或pH9.0的三羥甲基氨基甲烷緩沖液，或者可將其中的兩種混合使用。

4.根據權利要求1所述的一種采用緩沖液提取硫酸軟骨素的制備方法，其特征在于：所述樹脂純化過程中，其樹脂采用LKA98cl樹脂或D218樹脂或Dowex-X2。

5.根據權利要求1所述的一種采用緩沖液提取硫酸軟骨素的制備方法，其特征在于：所述豬或雞的軟骨選用鼻骨、氣管、喉骨部位。

6.根據權利要求1所述的一種采用緩沖液提取硫酸軟骨素的制備方法，其特征在于：所述硫酸軟骨素專用酶采用硫酸軟骨素專用酶A4，堿性蛋白酶選用2709堿性蛋白酶。

7.根據權利要求1所述的一種采用緩沖液提取硫酸軟骨素的制備方法，其特征在于：所述滅酶吸附步驟中，采用2mol/LHCL調pH值至7.0-7.4。

8.根據權利要求1所述的一種采用緩沖液提取硫酸軟骨素的制備方法，其特征在于：所述樹脂純化步驟中，解析液采用2.0mol·L^-1的NaCl。

9.根據權利要求1所述的一種采用緩沖液提取硫酸軟骨素的制備方法，其特征在于：所述醇沉脫水步驟中，2mol/LHCL調pH值至7.0。