[發明專利]一種新型等溫環介導銅綠假單胞菌核酸標記檢測試劑

無效

• 申請號: 201310736721.4
• 申請日: 2013-12-27
• 公開（公告）號: CN103667503A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發明（設計）人: 祁軍;左鋒;王馨;劉寅
• 申請（專利權）人: 天津國際旅行衛生保健中心
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種新型等溫環介導銅綠假單胞菌核酸標記檢測試劑，其特征在于，所述的檢測試劑包括銅綠假單胞菌等溫環介導核酸標記擴增反應液，該反應液中含有前外引物、后外引物、前促環引物、后促環引物、5’端標記生物素基團的前內引物、5’端標記異硫氰酸熒光素基團的后內引物、dNTPs溶液、具有鏈置換活性的DNA聚合酶（如：Bst?DNA聚合酶）、MgSO₄、無菌雙蒸水以及環介導等溫擴增的緩沖液。

2.根據權利要求1所述的一種新型等溫環介導銅綠假單胞菌核酸標記檢測試劑，其特征在于，使用的前外引物、后外引物、前促環引物、后促環引物、前內引物和后內引物的序列如下：

SEQ?ID?NO:1?5’-?AGCGGATGGCCGATCAG?-3’,

SEQ?ID?NO:2?5’-?GTAGCCGTAGGCCAGCG?-3’,

SEQ?ID?NO:3?5’-?TCGTCTTCGGCGGGGTG?-3’,

SEQ?ID?NO:4?5’-?GAGTCTGCCGGGCTTCTAC?-3’,

SEQ?ID?NO:5??5’-?CTGCTGCGGGTCTATGTGCCTTTTAGGGTCAGGCCGGTGC-3’,

SEQ?ID?NO:6??5’-?GTCGGGTTCCTGGTCCTGGGTTTTGCGGTTTCTATATCGCCGG?-3’。

3.根據權利要求1所述的一種新型等溫環介導銅綠假單胞菌核酸標記檢測試劑，其特征在于，使用該試劑，能夠在擴增目的基因的同時將擴增產物DNA上標記生物素基團和異硫氰酸熒光素基團。

4.根據權利要求1所述的一種新型等溫環介導銅綠假單胞菌核酸標記檢測試劑，其特征在于，將提取得到的待測DNA溶液作為擴增模板加入到裝有核酸恒溫標記擴增反應液的PCR管中，在60～65℃下擴增反應30～60分鐘，優選60℃下擴增反應60分鐘。

5.一種新型等溫環介導銅綠假單胞菌核酸標記檢測試劑所使用的膠體金檢測試紙，其特征在于，膠體金檢測試紙的金膠墊上含有標記后抗生物素抗體的金顆粒，膠體金檢測試紙層析膜的檢測線上包被有抗異硫氰酸生物素抗體，膠體金檢測試紙層析膜的質控線上包被有能和金顆粒上標記的抗生物素抗體結合的二抗。

6.根據權利要求4所述的一種新型等溫環介導銅綠假單胞菌核酸標記檢測試劑所使用的膠體金檢測試紙，其特征在于，將待測標記擴增產物滴加在檢測試紙的樣品墊上，當檢測線和質控線都呈現紅色時表明DNA樣品中含有銅綠假單胞菌的待測基因，當檢測線無色而質控線呈現紅色表明DNA樣品中不含有銅綠假單胞菌的待測基因。