[發(fā)明專利]一種補(bǔ)骨脂二氫黃酮甲醚C環(huán)羰基還原產(chǎn)物及生物制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310733711.5
• 申請日: 2013-12-23
• 公開（公告）號: CN103724310A
• 公開（公告）日: 2014-04-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 駱健美;申雁冰;王敏;梁奇坤;王家明;鄭宇
• 申請（專利權(quán)）人: 天津科技大學(xué)
• 主分類號: C07D311/32
• 分類號: C07D311/32;C12P17/06;A61K31/353;A61P35/00;C12R1/80
• 代理公司: 天津盛理知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 12209
• 代理人: 趙瑤瑤

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于微生物制藥及醫(yī)藥工程領(lǐng)域，尤其是一種補(bǔ)骨脂二氫黃酮甲醚C環(huán)羰基還原產(chǎn)物及生物制備方法。

背景技術(shù)

補(bǔ)骨脂二氫黃酮甲醚（Bavachinin）是一種二氫黃酮類化合物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)是在二氫黃酮骨架的A環(huán)7號位取代了一個甲氧基，A環(huán)6號位取代了一個異戊烯基。研究表明，該化合物具有抗氧化、抗細(xì)菌、抗真菌、抗炎、抗腫瘤、退熱性、止痛等多種生物和藥理活性。目前主要從天然植物Psoralea?corylifolia中分離得到，但由于較低的分離和純化效率，生產(chǎn)成本較高，導(dǎo)致其臨床應(yīng)用受到極大限制。因此，通過結(jié)構(gòu)修飾和改造獲得結(jié)構(gòu)多樣的新化合物，是提高該化合物生物利用度的重要方法。

二氫黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)修飾和改造工作中，還原反應(yīng)的發(fā)生及其發(fā)生的位點(diǎn)與它的藥理活性密切相關(guān)。目前二氫黃酮類化合物還原產(chǎn)物的化學(xué)制備方法具有反應(yīng)效率低、大量使用有機(jī)溶劑、產(chǎn)物分離純化困難等問題。

目前尚無利用微生物菌種制備補(bǔ)骨脂二氫黃酮甲醚C環(huán)羰基還原產(chǎn)物的生物制備方法的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種目標(biāo)產(chǎn)物產(chǎn)率高、分離純化過程簡單、成本低廉、無污染的補(bǔ)骨脂二氫黃酮甲醚C環(huán)羰基還原產(chǎn)物及生物制備方法。

本發(fā)明實(shí)現(xiàn)目的技術(shù)方案如下：

一種補(bǔ)骨脂二氫黃酮甲醚C環(huán)羰基還原產(chǎn)物，結(jié)構(gòu)式如下：

一種補(bǔ)骨脂二氫黃酮甲醚C環(huán)羰基還原產(chǎn)物的方法，以補(bǔ)骨脂二氫黃酮甲醚為底物，采用雷斯青霉（Penicillium?raistrickii）?ATCC?10490為生物催化劑進(jìn)行轉(zhuǎn)化反應(yīng)，獲得在補(bǔ)骨脂二氫黃酮甲醚C環(huán)羰基發(fā)生還原反應(yīng)的衍生物。

而且，具體步驟如下：

⑴生物催化劑的制備：制備濃度為10⁵-10⁸個/ml的雷斯青霉（Penicillium?raistrickii）?ATCC?10490的孢子懸浮液，以5%-15%的接種量接種于新鮮的發(fā)酵培養(yǎng)基中，26-30℃，120-200r/min培養(yǎng)24-60h，得到菌體發(fā)酵液；

⑵轉(zhuǎn)化反應(yīng)：向菌體發(fā)酵液中投入已經(jīng)溶解的補(bǔ)骨脂二氫黃酮甲醚，26-30℃，120-200r/min，培養(yǎng)24-120h后終止反應(yīng)；

⑶產(chǎn)物的提取與精制：轉(zhuǎn)化反應(yīng)結(jié)束后，抽濾，分離菌絲體和發(fā)酵液，分別用有機(jī)溶劑萃取菌絲體和發(fā)酵液，合并萃取液，干燥，減壓濃縮，濃縮后用硅膠色譜柱分離獲得補(bǔ)骨脂二氫黃酮甲醚C環(huán)羰基還原產(chǎn)物。

而且，分離獲得的補(bǔ)骨脂二氫黃酮甲醚C環(huán)羰基還原產(chǎn)物是利用有機(jī)溶劑通過重結(jié)晶得到在補(bǔ)骨脂二氫黃酮甲醚C環(huán)羰基發(fā)生還原反應(yīng)的衍生物的純品。

而且，所述用于重結(jié)晶的有機(jī)溶劑為石油醚、丙酮、正己烷、乙腈或甲醇。

而且，所述發(fā)酵培養(yǎng)采用的培養(yǎng)基組成g/L:葡萄糖5-30，玉米漿5-15，NaNO₃1-3，KH₂PO₄0.5-2，K₂HPO₄1-3，MgSO₄0.2-1，F(xiàn)eSO₄0.01-0.03，KCl0.2-1，pH7.0-8.0。

而且，所述補(bǔ)骨脂二氫黃酮甲醚投入的終濃度為：0.01-0.1g/L。

而且，所述步驟⑵中溶解補(bǔ)骨脂二氫黃酮甲醚的有機(jī)溶劑為乙醇、甲醇、二甲基亞砜或二甲基甲酰胺。

而且，所述的用于萃取處理的有機(jī)溶劑為乙酸乙酯、正丁醇、甲醇或乙酸丁酯。

一種補(bǔ)骨脂二氫黃酮甲醚C環(huán)羰基還原產(chǎn)物用于制備抗腫瘤藥物的應(yīng)用。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和積極效果如下：

1、本發(fā)明首次利用微生物轉(zhuǎn)化法對補(bǔ)骨脂二氫黃酮甲醚C環(huán)進(jìn)行羰基還原反應(yīng)，以補(bǔ)骨脂二氫黃酮甲醚為底物，采用雷斯青霉ATCC?10490為生物催化劑，轉(zhuǎn)化生成在補(bǔ)骨脂二氫黃酮甲醚C環(huán)羰基發(fā)生還原反應(yīng)的衍生物。

2、本方法克服了現(xiàn)有化學(xué)方法制備這類羰基還原產(chǎn)物過程中反應(yīng)步驟多、反應(yīng)效率低、產(chǎn)物分離純化困難等缺點(diǎn)，具有目標(biāo)產(chǎn)物產(chǎn)率高、分離純化過程簡單、成本低廉、無污染等優(yōu)點(diǎn)。

3、本發(fā)明制備得到的補(bǔ)骨脂二氫黃酮甲醚C環(huán)羰基還原產(chǎn)物是結(jié)構(gòu)新穎的新化合物，對正常細(xì)胞有一定的促進(jìn)增殖作用，具有和底物相當(dāng)或者更好的抗腫瘤活性，豐富了補(bǔ)骨脂二氫黃酮甲醚這類化合物作為藥劑使用的應(yīng)用范圍。

附圖說明