[發明專利]灰樹花多糖F2的制備方法及其降血糖功能

有效

• 申請號: 201310733480.8
• 申請日: 2013-12-25
• 公開（公告）號: CN103724445A
• 公開（公告）日: 2014-04-16
• 發明（設計）人: 吳清平;肖春;楊小兵;謝意珍;李森柱
• 申請（專利權）人: 廣東省微生物研究所;廣東粵微食用菌技術有限公司
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;C08B37/02;A61K31/716;A61P3/10
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 劉明星

技術領域：

本發明屬于生物醫藥領域，具體涉及一種具有降血糖作用的灰樹花多糖F2及其制備方法和用途。

背景技術：

糖尿病是一種以高血糖為特征的代謝紊亂綜合癥，全世界糖尿病患者以每年6%的速度增加。預計在2010年至2030年間，發展中國家的成年人總患病者會增加69%，發達國家會增加20%。糖尿病分為1型和2型糖尿病，其中2型糖尿病占整個總數的90%以上。目前的醫學尚不能攻克糖尿病，糖尿病的治療主要以長期服用藥物控制和緩解病情，然而目前臨床使用藥物多為化學藥物或生化藥物，毒副作用的長期積累對人體的影響很大。這一嚴峻形勢促使對糖尿病藥物的新藥開發重點轉向從自然界中尋找天然、安全、療效確切的新型活性成分。

馬迅從人工培養的灰樹花子實體中得到了一種降血糖活性多糖—分子量為400-450KD的α葡聚糖。Kubo等在進行灰樹花子實體多糖分離過程中，經過熱水提取物中再加入一倍量乙醇后產生了懸浮物，離心分離后得到了一種糖蛋白，即X-組分（糖：蛋白=65：35），具有顯著的降血糖活性，其相對分子質量5×10⁵D，結構分析表明，X-組分具有α-1，4-分支的β-1，6-葡聚糖。

現代藥理學研究結果表明，血糖的降低可以通過升高胰島素的含量，也可通過調節與糖代謝相關酶的活性，而促進葡萄糖的氧化利用，還可通過改善胰島素抵抗或抑制葡萄糖吸收等而實現。

從灰樹花子實體中提取得到的MT-α葡聚糖的作用機制可能是通過增加胰島素受體的數目從而增加胰島素敏感性和改善周圍組織對胰島素的抵抗。灰樹花水溶性提取物FXM很可能是通過改善對胰島素的抵抗達到降糖活性的。灰樹花子實體糖蛋白SX則可以改善葡萄糖耐量性；增加身體對胰島素的敏感性。

雖然目前已經發現灰樹花及其活性成分具有顯著的降血糖作用，但由于其化學結構復雜，絕大多數降血糖活性物質的成分、結構及其作用機理未能明確，直接阻礙了它們被開發成治療糖尿病新藥的進程。

發明內容：

本發明的目的是提供一種具有降血糖作用的新的灰樹花多糖F2及其制備方法。

本發明的灰樹花多糖F2是通過以下方法制備的，該方法包括以下步驟：

（a）取灰樹花（Grifola?frondosa）子實體，粉碎用熱水抽提，然后再過濾，在濾液中加入乙醇沉淀，分離沉淀；

（b）沉淀上DEAE?Sepharose?Fast?Flow色譜柱，先用Tris-HCl（10mM,pH=8.0）平衡，收集得到餾分F1；接著用含0.1M?NaCl的Tris-HCL（10mM,pH=8.0）洗脫，得到餾分F2，F2減壓濃縮，透析，干燥得灰樹花多糖F2。

步驟（a）中所述的沉淀，優選先溶解于熱水中，用0.45_μm直徑的微孔濾膜過濾，濾液裝入3000D孔徑的透析袋透析24h，得粗多糖溶液，再調整粗多糖溶液中灰樹花粗多糖的濃度，將此粗多糖溶液作為樣品進行步驟（b）的上樣層析分離。

該灰樹花多糖F2分子量為4.52×10⁵D，多糖含量為95.6%，蛋白含量為3.6%，多糖主要由葡萄糖、甘露糖、木糖、半乳糖、阿拉伯糖組成，氨基酸組分主要是脯氨酸（Pro）、絲氨酸（Ser）、天冬氨酸（Asp）、賴氨酸（Lys）、丙氨酸（Ala）、谷氨酸（Glu）、蘇氨酸（Thr）、甘氨酸（Gly）、精氨酸（Arg）、亮氨酸（Leu）和纈氨酸（Val），為β-吡喃糖環雜多糖，并且含有糖醛酸。根據上述參數，與現有技術中的灰樹花多糖進行比較，沒有發現相類似的，因此本發明的灰樹花多糖F2是一個新的灰樹花多糖。

取灰樹花多糖F2進行體內降血糖試驗，結果表明灰樹花多糖F2連續灌胃7天，可以顯著降低糖尿病大鼠的空腹血糖（*P<0.05），其降血糖機理主要是改善胰島素抵抗，從而降低血糖。

因此本發明的第二個目的是提供灰樹花多糖F2在制備治療糖尿病藥物中的應用，尤其是在制備治療2型糖尿病藥物中的應用。

本發明的第三個目的是提供一種治療糖尿病的藥物，其特征在于，該藥物以灰樹花多糖F2作為活性成分。

所述的糖尿病為2型糖尿病。

本發明從灰樹花子實體中分離出一種新的灰樹花多糖F2，該灰樹花多糖F2具有降血糖活性，可以用于制備治療糖尿病的藥物，尤其是治療2型糖尿病的藥物，為開發治療糖尿病的新藥打下基礎，積極推動糖尿病天然藥物活性成分的研究開發。

附圖說明：