[發明專利]一株香味菌屬菌株及其在制備烯丙基甲基硫醚中的應用

有效

• 申請號: 201310732431.2
• 申請日: 2013-12-27
• 公開（公告）號: CN103756932A
• 公開（公告）日: 2014-04-30
• 發明（設計）人: 古靜燕;李越中;劉會會;韓文君;趙帥;丁濤;衛潔
• 申請（專利權）人: 滕州市悟通香料有限責任公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P11/00;C12R1/01
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 彭成

1.一株香味菌屬菌株，菌株名為WTC05-2，分類命名為Myroides?sp.，已于2013年1月9日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC?No.7113。

2.權利要求1所述的香味菌屬菌株在制備烯丙基甲基硫醚中的應用。

3.根據權利要求2所述的應用，其特征在于：應用時，包括以下步驟：

（1）菌種選擇：選用權利要求1的菌株；

（2）菌種活化：將上述菌種劃線于固體培養基，在30℃靜置培養18小時，備用；

（3）種子培養：將上述步驟（2）培養的菌株用接種環挑取單菌落，接種于裝有50mL液體種子培養基的300mL三角瓶中，置搖床中震蕩培養，其轉速為200轉/分鐘，30℃培養12小時，得種子液；

（4）發酵培養：以體積比為1.0%的接種量，將步驟（3）所得種子液繼續接種于裝有100mL發酵培養基的500mL搖瓶中，在30℃、轉速為200轉/分鐘的條件下搖瓶培養42h，得發酵液；

（5）產物富集及純化：向上述發酵液中加入D101大孔吸附樹脂，提取24h，過濾，然后進行洗脫：先用水淋洗樹脂，再用有機試劑淋洗樹脂，收集有機試劑洗脫液，蒸除有機溶劑，即得烯丙基甲基硫醚。

4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于：還包括以下步驟（6）：上述有機試劑洗脫液的檢測：采用氣質聯用（GC-MS）鑒定有機試劑洗脫液中是否含有烯丙基甲基硫醚，以及其濃度。

5.根據權利要求3所述的應用，其特征在于：所述步驟（2）（3）（4）中的固體培養基、液體種子培養基、發酵培養基均為胰蛋白胨大豆肉湯培養基，其配方組成為：胰蛋白胨17g/L，植物蛋白胨3g/L，氯化鈉5g/L，磷酸二氫鉀2.5g/L，葡萄糖2.5g/L，pH7.2；固體培養基中還加入了濃度為2%的瓊脂。

6.根據權利要求3所述的應用，其特征在于：所述步驟（5）中的有機試劑為乙醚。

7.根據權利要求3所述的應用，其特征在于：所述步驟（5）具體為：按照20g/L添加量向上述發酵液中加入D101大孔吸附樹脂，提取24h，以100目的絹布過濾，將樹脂加入玻璃柱中，樹脂裝填高度10mm，按照2ml/min流速，先用4體積去離子水淋洗樹脂，再用3體積的有機試劑淋洗樹脂，收集第3柱體積的有機試劑洗脫液，即為含有烯丙基甲基硫醚的洗脫液，蒸除有機溶劑，即得烯丙基甲基硫醚。

8.根據權利要求3或7所述的應用，其特征在于：所述步驟（5）中的D101大孔吸附樹脂，使用前需進行預先處理，處理方式為：用飽和食鹽水浸泡18～20h,然后排盡食鹽水，用水漂洗凈，使排出的水不顯黃色，再用質量百分數為2%～4%的氫氧化鈉溶液浸泡2～4h，排盡堿液后，沖洗樹脂直至水為中性。

9.根據權利要求4所述的應用，其特征在于：所述步驟（6）中，GC-MS分析條件為：

（1）氣相色譜條件：RTX-1色譜柱，柱溫80℃，載氣He，載氣流量3.0ml/min；

（2）質譜檢測條件為：檢測器溫度250℃，4.5min后開始檢測，掃描質量范圍45～700。