[發明專利]CUG-BP1蛋白或其基因在制備調控治療肌肉萎縮疾病產品中的應用

有效

• 申請號: 201310731175.5
• 申請日: 2013-12-26
• 公開（公告）號: CN103705945A
• 公開（公告）日: 2014-04-09
• 發明（設計）人: 王會文;姬廣聚;唐迎龍
• 申請（專利權）人: 中國科學院生物物理研究所
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;A61P21/00;C12N15/113;C12N15/11;C12N15/63
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其涉及一種CUG-BP1蛋白或其基因在制備調控治療肌肉萎縮疾病產品中的應用。

背景技術

骨骼肌是人體最大的組織，骨骼肌的收縮和放松活動是人體運動功能的基礎。骨豁肌的基本組成單位是骨豁肌細胞，骨豁肌細胞是一種特殊的多核細胞，呈纖維狀，因此俗稱骨骼肌纖維。骨豁肌纖維的類型、形態、數量以及代謝狀態直接決定其運動能力。肌肉萎縮癥（Muscular?dystrophy,MD），指一組損壞人體肌肉的疾病。肌肉萎縮癥表現為進行性骨骼肌萎縮，肌肉蛋白質缺失，和肌肉細胞或組織的死亡。隨著肌肉萎縮發病率的逐年上升，受關注度也在不斷提升。

肌肉萎縮可以分為不同的類型：（1）按發病機理分類：由全身營養障礙，廢用，內分泌異常而引起的肌肉變性，肌肉結構異常等病因產生的肌肉萎縮；遺傳、中毒、代謝異常、感染、變態反應等引起的肌肉萎縮。（2）根據肌肉萎縮分布分類：全身彌漫性肌肉萎縮；頭面部肌肉萎縮；頭和上肢或上下肢近端肌肉萎縮；上下肢遠端肌肉萎縮；限局性肌肉萎縮。（3）根據導致肌肉萎縮的原發病變分類：神經原性肌肉萎縮；肌原性肌肉萎縮；廢用性肌肉萎縮。

肌肉萎縮作為一種常見疾病（并發癥），肌肉萎縮治療性研究一直為人們所關注。在康復醫學領域，運動鍛煉已被普遍采用。它在很大程度上對肌肉萎縮起到積極的預防和治療作用。但是，對于一些體弱、長期臥床或肢體固定的患者，由于受身體狀況等因素的影響，自身活動受限，無法實現有效的運動鍛煉，最終還是不可避免會導致骨骼肌萎縮的發生。當運動鍛煉不能有效克服骨骼肌萎縮時，探索生物技術干預手段來實現有效預防和治療就顯得十分必要。

目前，利用現代生物技術治療肌肉萎縮方面已經取得一些進展。例如：

（1）神經干細胞移植延緩失神經肌肉萎縮；（2）近年來，Duchenne型肌營養不良患者治療領域有了新的進展，方法學上有所創新：外顯子剪接(exon?skipping)治療。

RNA結合蛋白（RNA?binding?protein）是一類通過結合特定RNA序列，調控pre-mRNA剪接的多家族、多形式的蛋白因子。通過pre-mRNA選擇性剪接，單一的pre-mRNA可以形成不同的成熟mRNA，從而發揮不同功能。最近的研究發現大約92-94%人類基因存在選擇性剪接(Kwan?et?al.2008；Wang?et?al.2008)。同DNA轉錄一樣，基因選擇性剪接是基因表達調控的一個重要層次。CUG-BP1(cytosine-uridineguanine-binding?protein1)是一重要的RNA結合蛋白，通過結合富含UG的pre-mRNA序列，調控RNA穩定性（stability）、翻譯（translation）以及剪接（splicing）等過程(Barreau?et?al.2006)。

切神經誘導肌肉萎縮小鼠模型可以模擬臨床上偏癱、截癱、脊髓損傷、運動神經損傷或腫瘤壓迫運動神經造成的肌肉萎縮。尾部懸吊誘導肌肉萎縮的小鼠模型，模擬了長期臥床、廢用、宇航員失重引起的肌肉萎縮。

發明內容

本發明的一個目的是提供沉默CUG-BP1蛋白或其編碼基因表達的物質的應用。

本發明提供的沉默CUG-BP1蛋白或其編碼基因表達的物質在制備治療肌肉萎縮疾病產品中的應用；所述CUG-BP1蛋白的氨基酸序列為序列表中的序列10。

上述應用中，所述沉默CUG-BP1蛋白或其編碼基因表達的物質為如下1）-3）中任一種：

1）shRNA1或shRNA2；

2）編碼shRNA1的DNA分子或編碼shRNA2的DNA分子；

3）含有編碼shRNA1的DNA分子的重組載體、表達盒、轉基因細胞系或重組菌；

或含有編碼shRNA2的DNA分子的重組載體、表達盒、轉基因細胞系或重組菌；

所述shRNA1的核苷酸序列為序列表中的序列1；

所述shRNA2的核苷酸序列為序列表中的序列4。

上述應用中，所述含有編碼shRNA1的DNA分子的重組載體為將所述編碼shRNA1的DNA分子插入表達載體中得到的重組載體；

所述含有編碼shRNA2的DNA分子的重組載體為將所述編碼shRNA1的DNA分子插入表達載體中得到的重組載體。

上述應用中，所述表達載體為pSIREN-RetroQ。