[發明專利]一種減少溶媒使用的提取高純度恩拉霉素的方法

有效

• 申請號: 201310730536.4
• 申請日: 2013-12-26
• 公開（公告）號: CN103709235A
• 公開（公告）日: 2014-04-09
• 發明（設計）人: 趙松;王黎明
• 申請（專利權）人: 福建省福抗藥業股份有限公司
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/22;C07K1/18
• 代理公司: 福州君誠知識產權代理有限公司 35211
• 代理人: 戴雨君

技術領域

本發明涉及一種提取純化恩拉霉素的方法，尤其涉及一種減少溶媒使用的提取高純度恩拉霉素的方法。

背景技術

恩拉霉素是由包括13個不同種類的17個氨基酸分子和脂肪酸分子所組成的有機堿。其中，氨基酸分子構成環狀多肽結構，脂肪酸位于多肽結構末端。據其末端脂肪酸種類不同，分為恩拉霉素A和恩拉霉素B，恩拉霉素則是由這兩種成分組成的混合物。恩拉霉素的鹽酸鹽為白色結晶性粉末，分子量約為2500，熔點為238～245℃，易溶于二甲亞砜，可溶于甲醇、含水乙醇，難溶于丙酮，不溶于苯、氯仿。

恩拉霉素在飼料中具有很高的穩定性，在室溫條件下可長期儲藏，在制成顆粒料過程中也非常穩定，與飼料混合后在室溫下長期儲藏效價下降甚微。在腸道內不被降解，能夠保持原有的抗菌活性。

恩拉霉素在飼料中的微量添加，就可起到良好的促進生長和顯著提高飼料報酬的效果。無論在有氧和厭氧條件，恩拉霉素都能對革蘭氏陽性菌顯示良好的抗菌作用。但是，傳統技術中，采用浸泡萃取以及甲醇溶液充當溶媒的方式提取恩拉霉素，其產品收率在85.0%～87.0%之間，產品純度在97.2%～98.5%之間。由此可見，恩拉霉素產品的收率和純度比較低，生產中需要使用大量的甲醇溶液，生產成本較高，對環境也有一定的影響。

發明內容

本發明的目的是提供一種恩拉霉素收率高、減少溶媒使用的提取高純度恩拉霉素的方法。

為實現上述目的，本發明一種減少溶媒使用的提取高純度恩拉霉素的方法，所述方法包括以下步驟：

1）恩拉霉素發酵液經熱處理后真空抽濾，待恩拉霉素發酵液完全過濾后，得到的濾餅用2～4倍恩拉霉素發酵液體積的去離子水洗滌兩次，每次都減壓抽至無水滴流出，收集濕菌絲體；

2）將收集好的濕菌絲體稱重后放入大燒杯中，加入1～3倍濕菌絲體體積的去離子水和4～7倍濕菌絲體體積的甲醇或乙醇攪拌均勻，用鹽酸溶液調節PH至2.0～4.5后，在壓力60～100MPa，溫度30～40℃下，用勻漿機對調節好PH的菌絲體溶液進行破碎，得到的破碎液用離心機離心，收集上清液，再用1～3倍濕菌絲體體積的濃度30%～70%甲醇水或乙醇水分2～3次洗滌濾渣，離心，收集清液；

3）混勻上述清液后用氫氧化鈉溶液調節PH至5.9～6.1,按中和液體積的1～2%加入助濾劑，攪拌均勻，抽濾，收集濾液；濾渣用濃度30%～70%甲醇水或乙醇水溶液淋洗，收集清液，將清液與濾液混合形成混合液；

4）混合液采用納濾膜進行納濾濃縮分離，濃縮至原體積的1/5，分別收集濃縮液和滲透液，收集到的滲透液可以代替去離子水和甲醇循環使用；

5）往濃縮液中加入2～4倍濕菌絲體體積的濃度40%～70%甲醇水或乙醇水稀釋后，加入0.5%的氯化鈉，用物質的量為2～10mol的氫氧化鈉溶液調節PH至6.9～7.1，靜置30分鐘后，過濾，收集的濾液以每小時通過2倍量樹脂柱體積的流速通過已預處理的陽離子交換樹脂柱脫色，收集脫色液；

6）將脫色液按照每小時通過0.5倍量樹脂柱體積的流速分別通過裝有弱酸性大孔吸附樹脂和弱堿性大孔吸附樹脂的串聯樹脂柱進行吸附后，用含氯化鈉質量分數為0.5%、濃度為50%的甲醇或乙醇溶液洗滌，再用4L濃度為50%甲醇或乙醇溶液洗滌，接著用1～3倍量吸附樹脂體積、PH為4.0、濃度為40%～70%的甲醇水或乙醇水洗脫兩次，最后用物質的量為0.006mol濃度為40%～70%的甲醇水或乙醇水洗脫至流出液單位低于100ug/ml，分別收集同種物質洗提液；

7）將收集到的同種物質洗提液通過高壓制備梯度系統進行分離純化，得到恩拉霉素純度達99.5%以上的溶液；

8）上述的溶液經減壓濃縮至原體積的倍，然后用物質的量為2～10mol的濃鹽酸調節PH至0.85，在0～10℃下靜止一天后，離心分離，得到固形物；

9）固形物用水洗凈后，在壓強小于-0.08MPa、35～45℃的條件下干燥4～8小時，最后得到白色晶體狀的恩拉霉素。

所述步驟3）中加入的助濾劑為硅藻土、珍珠巖、纖維素或石棉。

所述步驟4）中采用的納濾膜截留分子量為200～500，滲透液流速控制在200～350L/h，濃縮壓力控制在1.0～2.4MPa范圍，濃縮液溫度控制在25℃～45℃。