[發明專利]一種天蘭草活性提取物的關鍵生產技術與鑒別方法

無效

• 申請號: 201310730303.4
• 申請日: 2013-12-26
• 公開（公告）號: CN103655945A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發明（設計）人: 朱峰;陳智剛;陳志豪;陳忻;龐秀枰;何忠東
• 申請（專利權）人: 佛山市夢莎美容化妝品有限公司;佛山市安安美容保健品有限公司;朱峰
• 主分類號: A61K36/85
• 分類號: A61K36/85;A61P31/04;A61P17/04;A61P17/00;G01N21/78
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明是關于一種天蘭草活性提取物的關鍵生產技術與鑒別方法，屬于生物化工技術領域。

背景技術

天蘭草為馬鞭草科一年生或多年生直立或半藤本狀灌木，高0.5-2米，莖枝無刺或有彎鉤刺，稍被毛。葉對生，卵形或矩圓狀卵形，長3-9厘米，寬2-3.5厘米，先端漸尖，基部闊楔形，邊緣有鈍齒，上面粗糙而有短刺毛，下面被小剛毛。全年開花，腋生，初為黃色、淡紅色，漸變橙色或深紅色，頭狀花序，稠密，苞片狹長，花冠長約1厘米。核果球形，肉質，長約5毫米，成熟時紫黑色，有骨質的小分核2顆。民間用其治療頭痛、小兒嗜睡和婦女陰癢，但其藥用價值還沒有得到全面開發利用。

發明內容

技術問題：本發明的目的在于提供一種天蘭草活性提取物的關鍵生產技術與鑒別方法。

解決方案：本發明為了達到上述目的而采用的技術解決方案如下。

本發明所述天蘭草活性提取物的關鍵生產技術是將藥用植物天蘭草的根、莖、葉、果或全草的甲醇提取物經過活性炭脫色、水-氯仿分配萃取、甲醇重結晶進一步純化，得到白色晶體狀的天蘭草活性提取物。該提取物經硼氫化鈉處理后與乙酸酐-濃硫酸混合后可呈現特殊的顯色反應，據此方法可快速對其進行定性鑒別。

發明有益效果：本發明的有益效果是采用本發明的關鍵生產技術可以高效獲得白色晶體狀的天蘭草活性提取物，并可以通過本發明發現的特殊顯色反應對其進行快速定性鑒別。另外，本發明的抗菌試驗結果證明，上述天蘭草活性提取物對供試病原菌具有顯著的抑制作用，可作為天然的具有抗菌消炎、祛疹止癢、清除頭皮屑等功效的活性添加劑應用于抗菌藥物和日用保健品的制備。

具體實施方式：以下實施例是對本發明的進一步說明，不是對本發明的限制。

實施例1?天蘭草活性提取物的關鍵生產技術。

采集藥用植物天蘭草的根、莖、葉、果或全草，風干，粉碎，稱取1kg藥粉，加入5L甲醇于50℃以下浸泡提取24h，浸泡期間不時搖晃，過濾，得甲醇浸泡提取液和藥渣，藥渣再加入5L甲醇重復提取一次。甲醇浸泡提取液合并，加入200g活性碳于50℃以下攪拌脫色，抽濾得金黃色濾液，濾液于50℃以下減壓濃縮回收甲醇后得到提取浸膏，將提取浸膏懸浮于水中，用等體積氯仿萃取2次，氯仿萃取液合并于50℃以下減壓濃縮回收氯仿后得到氯仿萃取物，氯仿萃取物加適量甲醇微熱溶解，于-18℃靜置24h，析出大量白色晶體，抽濾，晾干，得天蘭草活性提取物。

實施例2?天蘭草活性提取物定性鑒別。

乙酸酐-濃硫酸（9∶1）混合試劑：用時新鮮制備，制備方法是在不斷攪拌下將預先冷卻好的濃硫酸加入到在冰浴冷卻下的乙酸酐中。

定性鑒別方法：取1mL濃度為1mg/mL的天蘭草活性提取物的甲醇溶液置于一干燥干凈的試管中，然后加入適量硼氫化鈉固體試劑，將試管置于沸水浴中加熱完全揮發掉甲醇試劑，待試管冷卻至室溫后，加入3mL乙酸酐-濃硫酸（9∶1）混合試劑，顏色變化依次出現紅色、紫色、藍色，最后變為綠色。紅色、紫色和綠色時間非常短暫，但藍色相對穩定。這是本發明發現的天蘭草活性提取物的特有顯色反應，可據此進行鑒別。

實施例3?天蘭草活性提取物體外抑菌活性藥敏實驗。

采用紙片瓊脂擴散法測定天蘭草活性提取物的抑菌活性，根據紙片擴散法抑菌結果判斷標準，抑菌圈直徑＞20?mm為極敏，15-20?mm為高敏，10-15mm為中敏，＜10mm為低敏，無抑菌圈則不敏感。供試細菌有金黃色葡萄球菌（Staphylococcus?aureu）、大腸桿菌（Escherichia?coli）、綠膿桿菌（Pseudomonas?aeruginosa）和枯草芽孢桿菌（Bacillus?subtilis），供試真菌有腐皮鐮刀菌（Fusarium?solani）和寄生曲霉（Aspergillus?parasiticus）。以DMSO為溶劑將上述天蘭草活性提取物配制成濃度為5mg/mL的藥液，以純溶劑DMSO為空白對照，鏈霉素為陽性對照，接種后細菌于37℃孵育24h（真菌48h）后測定抑菌圈直徑大小，平行實驗三次，取平均值。試驗結果抑菌圈直徑分別為：金黃色葡萄球菌20mm、大腸桿菌21mm、綠膿桿菌37mm和枯草芽孢桿菌22mm、腐皮鐮刀菌59mm和寄生曲霉30mm。

抑菌活性藥敏實驗結果表明，在濃度為5mg/mL時，天蘭草活性提取物具有有效抑制革蘭氏細菌和靶真菌增殖的作用。因而可作為天然的具有抗菌消炎、祛疹止癢、清除頭皮屑等功效的活性添加劑應用于抗菌藥物和日用保健品的制備。