[發(fā)明專利]高效液相色譜法測(cè)定紅曲中γ-氨基丁酸含量的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310730192.7
• 申請(qǐng)日: 2013-12-26
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103713077A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-04-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王軒;武亞明;李靜靜
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 晨光生物科技集團(tuán)股份有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/88
• 分類號(hào): G01N30/88
• 代理公司: 石家莊冀科專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 13108
• 代理人: 劉偉

1.一種高效液相色譜法測(cè)定紅曲中γ-氨基丁酸含量的方法，其特征在于，其測(cè)定步驟為：（1）γ-氨基丁酸的提取：將稱取的紅曲樣品加到水中，超聲提取，離心分離收集上清液；

（2）醇沉：在上清液中加入乙醇和無(wú)機(jī)鹽溶液進(jìn)行醇沉處理，離心分離得到醇沉上清液；

（3）酶處理：醇沉上清液脫除溶劑，然后加入復(fù)合酶制劑進(jìn)行酶處理；

（4）脫色素處理：將酶處理后的濃縮液上柱吸附，樹(shù)脂吸附、氨水洗脫；洗脫液用微孔濾膜過(guò)濾，所得過(guò)濾液即為待檢測(cè)液；

（5）所述待檢測(cè)液經(jīng)柱前衍生化處理，即可采用液相色譜法測(cè)定。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效液相色譜法測(cè)定紅曲中γ-氨基丁酸含量的方法，其特征在于：所述步驟（1）中，紅曲樣品加到10～30倍體積超純水中，超聲提取1～4h；所述提取和分離步驟重復(fù)2～5次，合并上清液。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效液相色譜法測(cè)定紅曲中γ-氨基丁酸含量的方法，其特征在于：所述步驟（2）中，上清液加入1～2倍體積的乙醇和1/5～1/10體積的5wt%～10wt%無(wú)機(jī)鹽溶液，在-10℃～4℃靜置處理10～30min。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的高效液相色譜法測(cè)定紅曲中γ-氨基丁酸含量的方法，其特征在于：所述無(wú)機(jī)鹽為醋酸鉀、醋酸銨或硫酸銨。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效液相色譜法測(cè)定紅曲中γ-氨基丁酸含量的方法，其特征在于：所述步驟（3）中，復(fù)合酶制劑為蛋白酶、纖維素酶、淀粉酶和果膠酶的混合物；酶處理溫度為25～55℃，pH為3.5～9.0，靜置處理30～60min。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效液相色譜法測(cè)定紅曲中γ-氨基丁酸含量的方法，其特征在于：所述步驟（4）中，層析柱的柱床高為15～20cm，采用0.2～2mol/L的氨水洗脫。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效液相色譜法測(cè)定紅曲中γ-氨基丁酸含量的方法，其特征在于：所述步驟（5）中，采用鄰苯二甲醛和β-巰基乙醇為衍生化試劑進(jìn)行柱前衍生。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的高效液相色譜法測(cè)定紅曲中γ-氨基丁酸含量的方法，其特征在于：所述待檢測(cè)液中加入1～8倍體積衍生化試劑，避光混合1～5min進(jìn)行衍生，然后微孔濾膜過(guò)濾。

9.根據(jù)權(quán)利要求1－8任意一項(xiàng)所述的高效液相色譜法測(cè)定紅曲中γ-氨基丁酸含量的方法，其特征在于，所述步驟（5）中液相色譜法的測(cè)定步驟為：首先采用液相色譜檢測(cè)一系列具有梯度濃度的γ-氨基丁酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，繪制峰面積-濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線；再將經(jīng)柱前衍生化處理的檢測(cè)液用液相色譜檢測(cè)，根據(jù)峰面積-濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可得到紅曲樣品的γ-氨基丁酸含量。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的高效液相色譜法測(cè)定紅曲中γ-氨基丁酸含量的方法，其特征在于，所述液相色譜法的測(cè)定條件為：色譜柱為反相C18柱；檢測(cè)波長(zhǎng)為338nm；色譜柱溫度為室溫；流動(dòng)相A和流動(dòng)相B按比例混合均勻，其中流動(dòng)相A所占比例為30～70%，使用前經(jīng)微孔濾膜過(guò)濾，超聲波脫氣后使用；流動(dòng)相流速為0.5～1.5mL/min；進(jìn)樣量10～20μl。