[發(fā)明專(zhuān)利]一種人熱休克蛋白(Hsp90α)的檢測(cè)試紙及其制備方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310729382.7
• 申請(qǐng)日: 2013-12-14
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103713139A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-04-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 凌中鑫
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 凌中鑫
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/68
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/68
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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明公開(kāi)一種免疫層析試紙，具體涉及一種檢測(cè)人熱休克蛋白(Hsp90α)的免疫層析試紙及其制備方法。

背景技術(shù)

免疫層析試紙是一種利用層析原理將待檢測(cè)液中的目標(biāo)檢測(cè)分子或成分等在試紙上流動(dòng)至檢測(cè)線(T線)和質(zhì)控線(C線)，當(dāng)檢測(cè)線發(fā)生顏色變化則說(shuō)明檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，否則為陰性，當(dāng)質(zhì)控線發(fā)生顏色變化時(shí)，則說(shuō)明檢測(cè)結(jié)果有效，否則無(wú)效。

免疫層析試紙?jiān)跈z測(cè)或診斷某些疾病時(shí)具有非常便利的優(yōu)點(diǎn)，因此其已被充分運(yùn)用到多種疾病或癥狀的檢測(cè)或診斷過(guò)程中。一般情況下，免疫層析試紙包含有以下幾種結(jié)構(gòu)：樣品墊、結(jié)合墊、層析膜、吸水墊、支撐墊，所述樣品墊、膠體金結(jié)合墊、層析膜利吸水墊依次粘貼在支撐墊上；所述層析膜上依次設(shè)置有檢測(cè)線和質(zhì)控線；其工作原理為：將待測(cè)液滴加至樣品墊上，待測(cè)液利用層析原理流向結(jié)合墊，待測(cè)液中待測(cè)物與結(jié)合墊中的膠體金結(jié)合物結(jié)合，并與其共同依次流向?qū)游瞿ど系臋z測(cè)線和質(zhì)控線；當(dāng)待測(cè)液中含有目標(biāo)檢測(cè)分子，則目標(biāo)檢測(cè)分子、膠體金結(jié)合物會(huì)與檢測(cè)線內(nèi)包含的抗體成分結(jié)合從而形成免疫復(fù)合物，同時(shí)檢測(cè)線顏色發(fā)生變化；當(dāng)待測(cè)液流至質(zhì)控線時(shí)，質(zhì)控線內(nèi)包含的抗體成分會(huì)與膠體金結(jié)合物結(jié)合，從而質(zhì)控線顏色發(fā)生變化。

人熱休克蛋白90α，即Hsp90α，是熱休克蛋白家族中的重要成員。1989年國(guó)外專(zhuān)家首次報(bào)道了Hsp90α的基因序列，確認(rèn)了該蛋白的身份。1992年外國(guó)科學(xué)家發(fā)現(xiàn)，Hsp90α能被腫瘤細(xì)胞分泌到細(xì)胞外，但其分泌調(diào)控機(jī)制在此后很長(zhǎng)時(shí)間里并不清楚。

Hsp90α這一全新腫瘤標(biāo)志物的目前已得到確認(rèn)，同時(shí)揭開(kāi)了細(xì)胞外Hsp90α與細(xì)胞內(nèi)Hsp90α的分子差異，進(jìn)一步說(shuō)明了分泌型Hsp90α能促進(jìn)腫瘤侵襲及轉(zhuǎn)移，且其在血液中的含量與腫瘤惡性程度正相關(guān)。這些發(fā)現(xiàn)證明了血液中Hsp90α作為腫瘤標(biāo)志物的良好潛質(zhì)。Hsp90α腫瘤標(biāo)志物具有廣譜的特性，可用于肝癌、乳腺癌、結(jié)直腸癌等多個(gè)瘤種的臨床檢測(cè)，可實(shí)時(shí)準(zhǔn)確地反映治療效果。Hsp90α作為腫瘤標(biāo)志物，檢查更方便快捷，成本也人人降低。只需取一滴血，即可通過(guò)這種試劑盒檢測(cè)血漿中Hsp90α的含量。有些腫瘤患者盡管并未表現(xiàn)出相關(guān)癥狀，但其Hsp90α含量可能已經(jīng)升高，如果先檢測(cè)Hsp90α在血液中水平，再進(jìn)行深入檢查，就可能被確診為腫瘤，這能使患者早日接受治療，從而人人提高治愈率或延長(zhǎng)生存期。

此外，患者血漿中Hsp90α含量的高低與病情變化有較好的對(duì)應(yīng)性，因此可實(shí)時(shí)、較準(zhǔn)確地反映治療效果，為醫(yī)生制定和及時(shí)調(diào)整治療方案提供參考。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明提供一種檢測(cè)Hsp90α的免疫層析試紙及其制備方法，具有采樣容易、操作簡(jiǎn)便、反應(yīng)快速、敏感性高、特異性強(qiáng)、適合現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn)。

為解決以上技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明的技術(shù)方案是采用一種Hsp90α檢測(cè)免疫層析試紙，該免疫層析試紙包括有樣品墊、結(jié)合墊、層析膜、吸水墊和支撐墊；所述樣品墊、膠體金結(jié)合墊、層析膜、吸水墊依次按順序與支撐墊連接；其特征在于：層析膜上依次設(shè)置有檢測(cè)區(qū)和質(zhì)控區(qū)，所述檢測(cè)區(qū)靠近膠體金結(jié)合墊一端，質(zhì)控區(qū)靠近吸水墊一端；所述檢測(cè)區(qū)內(nèi)設(shè)置有檢測(cè)線，所述檢測(cè)線為由鼠抗人Hsp90α單克隆抗體包被形成；所述質(zhì)控區(qū)內(nèi)設(shè)置有質(zhì)控線，所述質(zhì)控線為由羊抗鼠IgG多克隆抗體包被形成；所述膠體金結(jié)合墊：將鼠抗人Hsp90α單克隆抗體和膠體金制備成膠體金結(jié)合墊。

所述檢測(cè)線以及質(zhì)控線中各抗體的工作液濃度為鼠抗人Hsp90α單克隆抗體3.0-2.5mg/mL、羊抗鼠IgG多克隆抗體1.0-2.0mg／mL。

所述檢測(cè)線以及質(zhì)控線中各抗體的工作液濃度為鼠抗人Hsp90α單克隆抗體2.0mg/mL、羊抗鼠IgG多克隆抗體3.0mg／mL。

所述Hsp90α檢測(cè)免疫層析試紙的制備步驟如下：

A、將各抗體檢測(cè)線工作液和質(zhì)控線工作液在硝酸纖維素膜上進(jìn)行包被，所得硝酸纖維素膜在36-38℃下干燥8-12小時(shí)得層析膜；

B、將鼠抗人Hsp90α單克隆抗體和膠體金制備成膠體金結(jié)合墊；

C、將A和B步驟所得的層析膜和膠體金結(jié)合墊按照樣品墊、膠體金結(jié)合墊、層析膜、吸水墊的順序依次粘貼在膠板上制備得所述檢測(cè)Hsp90α免疫層析試紙。

本發(fā)明的有益效果是：一種檢測(cè)Hsp90α的免疫層析試紙及其制備方法，和傳統(tǒng)試劑相比，具有采樣容易、操作簡(jiǎn)便、反應(yīng)快速、敏感性高、特異性強(qiáng)、適合現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)減少檢測(cè)人員的工作量的等優(yōu)點(diǎn)。

附圖說(shuō)明：

圖1Hsp90α檢測(cè)試劑盒試紙結(jié)構(gòu)示意圖。