[發(fā)明專利]一種內(nèi)生竹黃真菌發(fā)酵制備苝醌類化合物的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310727483.0
• 申請(qǐng)日: 2013-12-26
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103642864A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-03-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張志斌;李平;朱篤;顏日明;汪涯;楊慧林
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江西師范大學(xué)
• 主分類號(hào): C12P15/00
• 分類號(hào): C12P15/00;C12R1/645
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種制備苝醌類化合物的方法，尤其涉及一種內(nèi)生竹黃真菌發(fā)酵制備苝醌類化合物的方法。?

背景技術(shù)

苝醌（Perylenequinones，PQ）類化合物主要是從子囊菌綱和半知菌類真菌中分離到的一類具有光敏活性的色素。根據(jù)分子結(jié)構(gòu)的差異苝醌類化合物分為弗萊菌素型、交鏈孢毒素型及蒽醌類物質(zhì)3?大類化合物，其中弗萊菌素型主要包括竹紅菌素、痂囊腔菌素、弗萊菌素和尾孢素等化合物。?1980?年，中國(guó)學(xué)者萬(wàn)象義等從竹紅菌子實(shí)體中分離到一種新的苝醌類化合物，因源于竹紅菌而命名為竹紅菌甲素(HypocrellinA，HA)。1991?年，日本學(xué)者?Kishi?等從竹黃菌子座中分離得到另外兩種竹紅菌素，分別稱為竹紅菌乙素(HB)、竹紅菌丙素?(HC)。目前，已從竹黃中分離到?HA、HB?和?HC，其中對(duì)?HA?的研究最多，它是一種重要的天然光敏色素，在醫(yī)藥和食品領(lǐng)域有著巨大的潛在應(yīng)用價(jià)值。痂囊菌素可以由許多子囊真菌產(chǎn)生，包括痂囊腔菌素?A、痂囊腔菌素?B、痂囊腔菌素?C?和痂囊腔菌素?D四種。痂囊菌素最先由Weiss?等在?1957?年從?Elsinoe?培養(yǎng)物中分離得到，并對(duì)它們的物理化學(xué)性質(zhì)以及光敏抑菌性質(zhì)進(jìn)行了初步研究。此后一些研究者先后確定了痂囊腔菌素?A、B、C?和?D的結(jié)構(gòu)。隨著人們對(duì)各種苝醌類化合物認(rèn)識(shí)的增加，在對(duì)痂囊腔菌素光敏性質(zhì)以及光敏行為進(jìn)行了深入的研究同時(shí)，還發(fā)現(xiàn)痂囊腔菌素有很好的抗病蟲(chóng)害的作用，而且不會(huì)對(duì)人體產(chǎn)生間接的毒副作用。其中痂囊腔菌素?C可作為漂白劑，其漂白效果甚至要好于同為苝醌類化合物的竹紅菌甲素。?

發(fā)明專利200710132510.4介紹了一株產(chǎn)苝醌化合物的竹黃菌株Shiraia?sp.?SUPER-H168，其主要代謝產(chǎn)物為竹紅菌甲素和竹紅菌乙素。專利201110100965.4從蜈蚣衣屬植物地衣的內(nèi)生真菌Phaeosphaeria?sp.提取一類苝醌類化合物，其在抗真菌和抗腫瘤方面有潛在的應(yīng)用價(jià)值。專利201210127338.4發(fā)明了一種高產(chǎn)竹紅菌素的竹黃菌株Shiraia?bambusicola?ww67，該菌株液態(tài)發(fā)酵產(chǎn)量可達(dá)0.35%。劉為忠（《苝醌類化合物產(chǎn)生菌固態(tài)發(fā)酵工藝研究》，云南大學(xué)學(xué)報(bào)，2000,225（5）389-391）和沈云修《一株產(chǎn)苝醌類化合物的真菌化學(xué)成分研究》，中草藥，2003,34（2）：111-113）等報(bào)導(dǎo)了產(chǎn)苝醌類化合物的真菌。?

雖然已有報(bào)道可以通過(guò)液體發(fā)酵或者固體發(fā)酵來(lái)獲得苝醌類化合物，但產(chǎn)量不高且都是從竹林中篩選得到，本發(fā)明從江西廬山蛇足石杉內(nèi)生真菌中分離到一株高產(chǎn)苝醌類化合物的菌株Shiraia?sp.?slf-14，其液態(tài)發(fā)酵產(chǎn)量較高，該發(fā)明為傳統(tǒng)苝醌類化合物的發(fā)酵制備提供新的菌種來(lái)源和方法。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是，利用竹黃菌株Shiraia?sp.?slf-14，保藏號(hào)為?CCTCC?NO：M?209294，已在ZL200910186852.3公開(kāi)，通過(guò)液體發(fā)酵制備獲得竹紅菌甲素、竹紅菌乙素、痂囊腔菌素B及痂囊腔菌素C四種苝醌類化合物。?

本發(fā)明的技術(shù)方案：四種苝醌類化合物是從蛇足石杉內(nèi)生竹黃菌株Shiraia?sp.?slf-14發(fā)酵產(chǎn)物制備獲得的，其制備流程包括以下步驟：?

a）制備內(nèi)生竹黃菌株Shiraia?sp.?slf-14的發(fā)酵培養(yǎng)物，將內(nèi)生真菌Shiraia?sp.?Slf14發(fā)酵菌體進(jìn)行干燥、碾碎，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)60%的乙醇浸提3次，每次24h，合并提取液后減壓濃縮，用等體積的石油醚、乙酸乙酯進(jìn)行梯度萃取，石油醚相減壓濃縮后得到浸膏A；乙酸乙酯相減壓濃縮后得到浸膏B；

b)?將浸膏A經(jīng)硅膠柱層析，用石油醚/?乙酸乙酯作為洗脫劑，從體積比100∶0?～0∶100進(jìn)行梯度洗脫，收集石油醚/?乙酸乙酯體積比20∶80梯度洗脫下來(lái)的餾分A1；餾分A1經(jīng)硅膠柱層析，以氯仿-甲醇體積比從100∶0?～0∶100梯度洗脫，收集氯仿/甲醇以20：1的餾分，重結(jié)晶分離到化合物Ⅰ和Ⅱ，分別為竹紅菌甲素和竹紅菌乙素；

c)?將浸膏B經(jīng)硅膠柱層析，用氯仿/甲醇作為洗脫劑，從體積比100：0～0:100進(jìn)行梯度洗脫，獲得餾分B1，B2及B3，其中流分B1分別經(jīng)正相硅膠柱色譜（氯仿-甲醇200：1）反復(fù)洗脫、重結(jié)晶分離到化合物Ⅰ和Ⅱ，分別為竹紅菌甲素和竹紅菌乙素；而餾分B2和B3分別經(jīng)正相硅膠柱色譜（氯仿-甲醇50：1，20：1）反復(fù)洗脫、重結(jié)晶分離到化合物Ⅲ和Ⅳ，即為痂囊腔菌素B和痂囊腔菌素C；