[發明專利]篩選評價海洋防污劑的試劑組合

無效

• 申請號: 201310725861.1
• 申請日: 2013-12-25
• 公開（公告）號: CN103710422A
• 公開（公告）日: 2014-04-09
• 發明（設計）人: 徐煥志;孫靜亞;沈明
• 申請（專利權）人: 浙江海洋學院
• 主分類號: C12Q1/18
• 分類號: C12Q1/18
• 代理公司: 杭州浙科專利事務所(普通合伙) 33213
• 代理人: 吳秉中

技術領域

本發明涉及一種快速篩選評價方法的試劑，尤其涉及篩選評價海洋防污劑的試劑組合。

背景技術

海洋生物污損問題，制約著人類對海洋資源的開發利用，并帶來巨大的經濟損失。目前，防除海洋生物污損最常用的方法是涂裝防污涂料。防污劑是防污涂料最主要的防除海洋生物污損有效成份之一，篩選評價防污劑是防污涂料研發過程不可缺少的步驟。提高完善防污性能的評價方法，對防污涂料開發具有重要意義。國標GB/T5370-2007《防污漆樣板淺海浸泡試驗方法》中提供了一種防污涂料評價方法，將防污劑配成防污涂料后也可用來國標GB/T5370-2007中方法評價防污劑的防污性能，但是評價周期長。中國作者田斌2005年的碩士論文《海洋防污涂層生物學性能研究》中用金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、酒精酵母3種菌株作為受試生物來評價防污劑的防污性能，但由于受試生物不是典型海洋細菌，不能代表海洋菌種,評價結果代表性常受質疑。

發明內容

本發明的目的是提供篩選評價海洋防污劑的試劑組合和應用，它以分離自海洋的海洋細菌為受試生物，將凝膠劑加入到細菌液體培養基中加熱溶解后冷卻制成凝膠溶液，將受試化合物均勻分散在凝膠溶液中，然后將含受試化合物凝膠溶液均勻涂布玻璃板上制成凝膠測試板，再將凝膠測試板置于接種受試生物的海水中，連續培養后，將凝膠測試板取出、淋洗，定容于容量瓶中，測試OD值（光密度值）或吸光度值，將OD值或吸光度值換算成抑菌率，通過比較抑菌率的大小評價受試化合物的防污性能。所述的評價方法操作簡單、易行，評價周期短，用海洋細菌為受試生物，可應用于海洋防污涂料研發過程中防污劑的篩選。

上述的海洋細菌，其特征是用選擇性培養基，自海水、海洋沉積物、涉海設施浸海部分分離出。

上述的選擇性培養基是Zobell?2216?E培養基、海洋弧菌用TCBS培養基、分離放線菌用高氏合成1號培養基、腐殖酸培養基、天門冬素培養基、精氨酸培養基、上述的改良型培養基的一種或幾種。

上述的液體培養基是Zobell?2216?E液體培養基、海洋弧菌用TCBS液體培養基、分離放線菌用高氏合成1號液體培養基、腐殖酸液體培養基、天門冬素液體培養基、精氨酸液體培養基、上述的改良型液體培養基的一種或幾種。

上述的凝膠劑是瓊脂、明膠、魚膠、卡拉膠中的一種或幾種。

上述凝膠測試板的制作方法，其特征是將凝膠劑加入到細菌液體培養基中加熱溶解后冷卻制成凝膠溶液，將受試化合物均勻分散在凝膠溶液中，然后將含受試化合物凝膠溶液均勻涂布在玻璃板上制成。

上述的玻璃板，是長100?mm、寬100mm或長200?mm、寬200mm或長250?mm、寬2500mm表面光滑的玻璃板。

上述的測試OD值或吸光度值的方法，其特征是是用酶標儀或可見分光光度計，以液體基培養基為參比，測定凝膠測試板淋洗液的OD值或吸光度值。

上述的評價方法在研發海洋防污涂料過程中篩選防污劑時的應用。

本發明的篩選評價海洋防污劑方法的優點是以海洋細菌為受試生物，代表性強，評價方法操作簡單、易行，評價周期短。

具體實施方式

以下結合附實施例對本發明作進一步詳細描述。

實施例：

1、海洋細菌的分離

用海水選擇性培養基，用濾膜富集的的方法或涂布法或劃線法中的一種或幾種方法培養并分離取自海水、海洋沉積物、涉海設施浸海部分的海洋細菌，低溫下保存備用。

（1）從海水中分離細菌：

用滅菌的硝化纖維濾膜按不同體積海水量進行富集，富集后的濾膜取下，接種到預先編號的平板培養基上，培養一定時間后，進行分離，并在低溫下保存菌種。

用無菌采水瓶從舟山東極島附近海區三個站位取水樣。用滅菌的硝化纖維濾膜（0.45um），分別對100mL、200mL、300mL海水樣品進行富集，取下濾膜，分別緊貼于上述三種預先編好號的含有Zobell?2216?E固體培養基的培養皿上。將培養皿放置10min后，倒置放于25℃生化培養箱中，培養3-5天，觀察其形態，記錄數量，如菌落不純，挑取菌落用劃線法分離，直到純化，而后接種于斜面，甘油液封，-20℃下，保存備用。

（2）從涉海設施浸海部分分離細菌：