[發(fā)明專利]成人的髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞系及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310722702.6
• 申請日: 2013-12-24
• 公開（公告）號: CN103695371A
• 公開（公告）日: 2014-04-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 任勇;卞修武;崔有宏
• 申請（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)第一附屬醫(yī)院
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09;C12Q1/02;C12R1/91
• 代理公司: 北京同恒源知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11275
• 代理人: 趙榮之

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域，涉及一種腫瘤細(xì)胞系。

背景技術(shù)

髓母細(xì)胞瘤是兒童最常見的惡性腦腫瘤，發(fā)病高峰年齡為8歲；僅30%的髓母細(xì)胞瘤發(fā)生于成人。由于發(fā)病率較低，目前全世界已有的髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞系非常有限，僅有Daoy、D283、D341Med、BO-1、MED-FU、ONS-76和ONS-81幾種，且均來源于兒童。近年來，隨著對髓母細(xì)胞瘤研究的深入，大量證據(jù)表明，兒童和成人的髓母細(xì)胞瘤在遺傳背景及臨床預(yù)后等方面均有不同。例如，成人的髓母細(xì)胞瘤通常發(fā)生于小腦半球，而兒童的髓母細(xì)胞瘤多發(fā)生于小腦蚓部；成人的髓母細(xì)胞瘤組織學(xué)類型上多以促結(jié)締組織增生型為主，且比兒童的髓母細(xì)胞瘤預(yù)后更差。因此，有必要分離并建立一系列具有不同生物學(xué)特性的髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞系，以滿足對髓母細(xì)胞瘤及其治療藥物的深入研究需要。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明的目的在于分離并建立具有不同生物學(xué)特性的髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞系，以滿足對髓母細(xì)胞瘤及其治療藥物的深入研究需要。

經(jīng)研究，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

成人的髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞系XQ625，保藏號為CCTCC?No：C2013171。

發(fā)明人收集了2011-2013年間中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)第二附屬醫(yī)院術(shù)前診斷疑是髓母細(xì)胞瘤的13例標(biāo)本，手術(shù)中取材進(jìn)行原代細(xì)胞的培養(yǎng)。術(shù)后病理診斷為髓母細(xì)胞瘤的5例標(biāo)本（MB1-MB5）均在體外成功分離培養(yǎng)原代髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞，并規(guī)律傳代。在傳代培養(yǎng)過程中發(fā)現(xiàn)，隨著傳代次數(shù)的增加，細(xì)胞的增殖能力逐漸減弱，4例原代髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞在培養(yǎng)十幾代后細(xì)胞的分化現(xiàn)象非常明顯，細(xì)胞生長停滯，僅1例原代髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞（MB4）可以連續(xù)傳代，由此建立了穩(wěn)定的髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞系XQ625。

髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞系XQ625來源于成人，發(fā)生于小腦蚓部，其病理診斷依據(jù)2007年WHO中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤分類屬于經(jīng)典型髓母細(xì)胞瘤。

對XQ625細(xì)胞的生物學(xué)特性研究發(fā)現(xiàn)：細(xì)胞的倍增時間為42小時；細(xì)胞周期為G₁期占53.93%，G₂期占16.07%，S期占30.00%；在裸鼠體內(nèi)，1×10⁴個XQ625細(xì)胞即能起始腫瘤的發(fā)生；移植瘤細(xì)胞呈彌散分布，細(xì)胞小而圓，核漿比大，核分裂相易見，胞漿少，胞漿內(nèi)細(xì)胞器少，可見核糖體及線粒體，呈較原始的未分化狀態(tài)；免疫組化標(biāo)記Vimentin呈陽性，Ki67約95%細(xì)胞呈陽性，其余免疫組化標(biāo)記CD99、CgA、GFAP、Pan-CK、Syn、LCA、EMA、Desmin和S-100均為陰性。

本發(fā)明的成人髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞系XQ625可以用于制備或篩選抗髓母細(xì)胞瘤的藥物。例如，通過體外實驗篩選出具有抑制或殺傷XQ625細(xì)胞的抗體，可將此抗體作為治療髓母細(xì)胞瘤藥物的主要成分，或篩選出特異識別XQ625細(xì)胞的抗體作為靶向工具，制備抗髓母細(xì)胞瘤的靶向藥物。

本發(fā)明的有益效果在于：本發(fā)明在對5例髓母細(xì)胞瘤原代進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)的過程中，成功建立了一株發(fā)生于成人的髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞系，并對其細(xì)胞生物學(xué)特性進(jìn)行了研究，該細(xì)胞系在體外能夠長期傳代培養(yǎng)，在裸鼠體內(nèi)1×10⁴即能起始腫瘤的發(fā)生，既有助于滿足對髓母細(xì)胞瘤的深入研究需要，又是研制抗髓母細(xì)胞瘤藥物的有力工具，具有潛在良好的應(yīng)用前景。

生物材料保藏

成人的髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞系XQ625，于2013年11月5日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心（簡稱CCTCC，地址：中國.武漢.武漢大學(xué)），保藏號為CCTCC?No：C2013171。

附圖說明

為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和有益效果更加清楚，本發(fā)明提供如下附圖進(jìn)行說明：

圖1為髓母細(xì)胞瘤原代標(biāo)本的HE染色，其中A-E分別為MB1-MB5腫瘤組織HE染色，放大倍數(shù)×200；F-J分別為MB1-MB5腫瘤組織HE染色，放大倍數(shù)×400。

圖2為髓母細(xì)胞瘤原代細(xì)胞的倒置相差顯微鏡觀察，其中A-E分別為MB1-MB5髓母細(xì)胞瘤原代細(xì)胞培養(yǎng)的形態(tài)特征，放大倍數(shù)×100。

圖3為不同代數(shù)P1、P21和P41的髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞XQ625的倒置相差顯微鏡觀察，其中A-C分別為XQ625細(xì)胞P1、P21和P41的形態(tài)特征，放大倍數(shù)×100；D-F分別為XQ625細(xì)胞P1、P21和P41的形態(tài)特征，放大倍數(shù)×200。