[發明專利]抗豬流行性腹瀉病毒高免血清及其制備方法

有效

• 申請號: 201310722570.7
• 申請日: 2013-12-24
• 公開（公告）號: CN103705918B
• 公開（公告）日: 2019-08-06
• 發明（設計）人: 侯艷紅;王貴華;趙亞榮;于萍萍;劉明明;滿坤;陳翠云;盧會英
• 申請（專利權）人: 北京大北農科技集團股份有限公司動物醫學研究中心;福州大北農生物技術有限公司;北京科牧豐生物制藥有限公司;北京大北農科技集團股份有限公司
• 主分類號: A61K39/215
• 分類號: A61K39/215;A61P31/14
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了采用豬流行性腹瀉病毒ZJ08株CGMCC No.7806的的滅活疫苗為免疫原免疫50?60日齡長大二元豬，經三次免疫，制備了高免血清。本發明制備的高免血清性狀良好，無細菌、霉菌、支原體及外源病毒污染，特異性強，安全性好，人工感染治愈率達100%。血清中和效價在2⁶以上，對血清進行分裝，?70℃，保存期12個月。

技術領域

本發明涉及一種抗病毒血清的制備方法，具體是一種抗豬流行性腹瀉病毒高免血清及其制備方法。

背景技術

豬流行性腹瀉（Porcine epidemic diarrhea, PED）是引起豬腹瀉的一種急性、接觸性病毒性腸道傳染病，以水樣腹瀉、嘔吐、脫水和食欲下降為特征。PEDV可在豬群中持續存在，各種年齡豬均易感。哺乳仔豬、架子豬和育肥豬的發病率可達100%，尤以哺乳仔豬嚴重，病死率達100%。該病是一種病毒病，目前尚無有效的治療藥物方法。給妊娠母豬接種疫苗，仔豬可通過初乳以被動免疫的方式獲得抵抗力，但是隨著母源抗體的消失或參差不齊，仔豬的抵抗力逐漸下降或不同，對流行性腹瀉的易感性也表現不同，一旦發病，就造成巨大的經濟損失。采用高免血清進行群體治療是以被動免疫的方式使仔豬獲得免疫力，達到保護仔豬的目的。目前為止，這種方法是可行的。但是臨床上流行的豬流行性腹瀉病毒毒株一旦發生變異，由此制備的高免血清治療效果就會減弱，感染豬的發病率和死亡率就會增加。

發明內容

為了解決上述問題，本發明提供一種抗豬流行性腹瀉病毒高免血清及其制備方法。

首先，本發明提供一種抗豬流行性腹瀉病毒高免血清，其為以豬流行性腹瀉病毒ZJ08株CGMCC No.7806的滅活疫苗為免疫原，從免疫豬中分離血清制得。

其中，所述的豬流行性腹瀉病毒ZJ08株CGMCC No.7806的滅活疫苗為將豬流行性腹瀉病毒ZJ08株滅活與油佐劑乳化制備而成。

本發明還提供所述的抗豬流行性腹瀉病毒高免血清的制備方法，包括如下步驟：

1）免疫：以所述的豬流行性腹瀉病毒滅活疫苗為免疫原免疫50-60日齡長大二元豬，第一次免疫：肌肉注射共4ml，第二次免疫：在第一次免疫后14日進行，免疫劑量8ml，分兩點注射，第三次免疫：在第二次免疫后14日進行，免疫劑量16ml，分三點注射；

2）采血：最后一次免疫后15～21日，檢測中和抗體效價，達到2⁹以上時，殺豬無菌放血；

3）血清分離與制備：用消毒刀將凝固血劃成1-3平方厘米的小塊，濾出血清，分裝于無菌生理鹽水瓶中，其余置于-70℃保存。

本發明的PEDV ZJ08株是申請人從浙江一發病豬場分離到的強毒株經過105代致弱后獲得的豬流行性腹瀉病毒弱毒株，是目前國內的PEDV流行株，該疫苗株毒力穩定，安全，免疫原性好，能夠抵抗目前臨床上流行的強毒株的攻擊，保護率達90%以上。

將分離到的PEDV 105-145代PEDV致弱株命名為豬流行性腹瀉病毒ZJ08株，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心；保藏地址是：北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所，保藏編號是CGMCC No. 7806，保藏時間是2013年6月28日。

本發明成功試制出了抗豬流行性腹瀉病毒的高免血清，其物理性狀良好，無細菌、霉菌和支原體生長，無外源病毒污染，中和抗體效價在2⁶倍以上。試驗結果表明，本血清不但具有較高的抗體效價，而且還具有很強的特異性，完全符合檢測用血清標準的要求，為評價疫苗免疫效力提供了有力工具。血清效力評估結果表明，本發明制備的高免血清治愈率更高。

附圖說明

圖1為PEDV CPE圖片（400×）。