[發(fā)明專利]一套高效銅抗性標(biāo)記釀酒酵母表達(dá)系統(tǒng)及其應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310722485.0
• 申請日: 2013-12-24
• 公開（公告）號: CN103695456A
• 公開（公告）日: 2014-04-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 諸葛斌;盛冠一;宗紅;陸信曜;方慧英;諸葛健
• 申請（專利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類號: C12N15/81
• 分類號: C12N15/81;C12N15/65
• 代理公司: 北京愛普納杰專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11419
• 代理人: 何自剛;王玉松

1.一套高效銅抗性標(biāo)記釀酒酵母表達(dá)系統(tǒng)，其特征在于包括一種銅離子敏感型釀酒酵母W303-1Acup1及含有CUP1銅抗性篩選標(biāo)記的酵母表達(dá)載體，所述釀酒酵母W303-1Acup1的構(gòu)建方法為：

以質(zhì)粒pFA6a-His3Mx6為模板，設(shè)計引物，PCR擴(kuò)增出敲除片段P1-his-P2；

將步驟1）獲得的敲除片段醋酸鋰轉(zhuǎn)化進(jìn)入野生型釀酒酵母W303-1A，得到銅離子敏感型釀酒酵母W303-1Acup1；

所述含有CUP1銅抗性篩選標(biāo)記的構(gòu)建方法為：

以野生釀酒酵母為模版，設(shè)計引物，擴(kuò)增出cup1基因；

將步驟3）獲得的cup1基因連接到酵母表達(dá)載體上。

2.權(quán)利要求1所述的表達(dá)系統(tǒng)，其特征在于所述表達(dá)載體為pYX212；所述含有CUP1銅抗性篩選標(biāo)記的酵母表達(dá)載體為pYX212M。

3.權(quán)利要求1所述表達(dá)系統(tǒng)的應(yīng)用，其特征在于將表達(dá)載體pYX212M承載的基因轉(zhuǎn)化釀酒酵母W303-1Acup1，選擇0.3mMCu2+的SC培養(yǎng)基作為篩選培養(yǎng)基，得到了含有以CUP1為高效篩選標(biāo)記的pYX212M表達(dá)載體的酵母轉(zhuǎn)化子。

4.一種表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)綠色熒光蛋白基因（gfp）的方法，其特征在于，將gfp基因插入表達(dá)載體pYX212M，采用醋酸鋰轉(zhuǎn)化釀酒酵母W303-1Acup1，可高效表達(dá)綠色熒光蛋白。

5.一種釀酒酵母表達(dá)表達(dá)異源蛋白的方法，其特征在于，將異源蛋白基因插入表達(dá)載體pYX212M，采用醋酸鋰轉(zhuǎn)化釀酒酵母W303-1Acup1，可高效表達(dá)綠色熒光蛋白。