[發(fā)明專利]一種枯草芽孢桿菌飼料添加劑及其制備方法和應(yīng)用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201310719942.0 | 申請日： | 2013-12-24 |
| 公開（公告）號： | CN103981118B | 公開（公告）日： | 2017-11-03 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 喬琳;姚宏明;高長斌;劉蕊;金忠輝 | 申請（專利權(quán)）人： | 北京大偉嘉生物技術(shù)股份有限公司;沈陽偉嘉牧業(yè)技術(shù)有限公司 |
| 主分類號： | C12N1/20 | 分類號： | C12N1/20;A23K10/18;C12R1/125 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 100085 北*** | 國省代碼： | 北京;11 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 枯草 芽孢 桿菌 飼料添加劑 及其 制備 方法 應(yīng)用 | ||
1.一種枯草芽孢桿菌飼料添加劑，其特征在于，所述枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)為WEI-2，保藏編號為CGMCC No. 7744。
2.一種枯草芽孢桿菌飼料添加劑的制備方法，其特征在于，枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)為WEI-2 CGMCC No. 7744作為畜禽飼料添加劑的制備方法，具體步驟如下：
1)斜面菌種的活化：從枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)WEI-2 CGMCC No. 7744的保藏甘油管中挑一環(huán)菌液劃線于營養(yǎng)瓊脂平板，于32-37℃，培養(yǎng)15-20h，使芽孢桿菌復(fù)壯，并長出單菌落，挑單菌落劃線于斜面培養(yǎng)基進(jìn)行活化，所述斜面培養(yǎng)基為營養(yǎng)瓊脂，配方為：每1000mL水中含有：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化鈉5g，瓊脂15-20g， pH值為7.2-7.4，常規(guī)滅菌；
2)種子搖瓶的制備：從上述培養(yǎng)好的斜面上挑一環(huán)菌種接于裝有250-300mL液體種子培養(yǎng)基的1000mL三角瓶中，于35-37℃，振蕩培養(yǎng)20-30h，即得枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis) WEI-2 CGMCC No.7744的搖瓶種子液，所述搖瓶種子培養(yǎng)基的配方為：每1000mL水中含有：蛋白胨20g，酵母膏10g，三水合磷酸氫二鉀1g，一水合硫酸錳0.1g，pH值為7.4，常規(guī)滅菌，
3)種子罐的培養(yǎng)：將上述制備好的搖瓶種子液按照1% (v/v)的接種量接入裝有種子發(fā)酵培養(yǎng)基的種子發(fā)酵罐中，于35-37℃，培養(yǎng)20-25h，攪拌轉(zhuǎn)速為250-300rpm，控制適當(dāng)通氣量，并加入適量消泡劑，得到二級種子發(fā)酵液，所述種子發(fā)酵培養(yǎng)基與搖瓶種子培養(yǎng)基的配方一致；
4)生產(chǎn)發(fā)酵：將上述制備好的種子發(fā)酵液按照1-2% (v/v)的接種量接入裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的生產(chǎn)發(fā)酵罐中，于35-37℃，發(fā)酵25-30h，攪拌轉(zhuǎn)速為250-300rpm，控制適當(dāng)通氣量，并加入適量消泡劑，發(fā)酵結(jié)束獲得枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis) WEI-2 CGMCC No. 7744的活菌發(fā)酵液，所述發(fā)酵培養(yǎng)基的配方為：每1000mL水中含有：蛋白胨20g，酵母膏5g，葡萄糖10g，三水合磷酸氫二鉀1g，一水合硫酸錳0. 15g，七水合硫酸鎂0.3g，pH值為7. 2；
5)發(fā)酵液后處理：發(fā)酵結(jié)束后的發(fā)酵液通過高速管式離心機(jī)富集菌體后轉(zhuǎn)移至混合攪拌罐中，按照載體與菌泥的質(zhì)量比為2:1-3:1的比例向混合攪拌罐中加入載體，混合均勻，同時將噴霧干燥設(shè)備的蒸汽壓力保持在0.3-0.6MPa，進(jìn)口溫度達(dá)到180-200℃，出口溫度達(dá)到110-140℃，塔內(nèi)壓力保持在-12-18Pa，然后打開進(jìn)料罐閥門，開始水噴霧，待壓力穩(wěn)定，出口溫度保持在80-90℃時，打開打漿泵，將菌泥與載體的混合物料打入緩沖罐，開始噴霧干燥，干燥過程中保持罐內(nèi)壓力及進(jìn)出口溫度的穩(wěn)定，干燥后的干粉粉碎至80目以上，獲得枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis) WEI-2 CGMCC No. 7744的活性干燥菌粉，利用營養(yǎng)瓊脂平板對活性干燥菌粉進(jìn)行計數(shù)，根據(jù)計數(shù)結(jié)果，利用載體將活菌含量稀釋至≥200億CFU/g，得到成品菌粉，所述載體為可溶性淀粉，所述高速管式離心機(jī)收集菌體的轉(zhuǎn)速為15000-20000rpm。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述枯草芽孢桿菌飼料添加劑的應(yīng)用，其特征在于，枯草芽孢桿菌WEI-2作為畜禽飼料添加劑的應(yīng)用時按照0.05-0.l‰ 拌全價飼料。
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