[發(fā)明專利]過敏性疾病變應(yīng)原膠體金診斷試紙條及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310718509.5
• 申請日: 2013-12-23
• 公開（公告）號: CN103675271A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 白彩明;馬曉暉;湯承祁;裴瀟竹;姜敏;李雪妮;王兆仿
• 申請（專利權(quán)）人: 北京新華聯(lián)協(xié)和藥業(yè)有限責(zé)任公司
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558
• 代理公司: 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及變應(yīng)原檢測領(lǐng)域，具體地說，涉及一種過敏性疾病變應(yīng)原膠體金診斷試紙條及其制備方法。

背景技術(shù)

變應(yīng)性疾病（又稱過敏性疾病）包括特應(yīng)性皮炎、食物過敏、變應(yīng)性鼻炎和過敏性哮喘等，其發(fā)病率日益增高，且病情逐趨復(fù)雜化。WHO已將變應(yīng)性疾病列為21世紀(jì)重點(diǎn)研究和防治的疾病。近年，隨著免疫組化、分子生物學(xué)技術(shù)和臨床新技術(shù)，如纖維支氣管鏡的開展，已對此病有了共識(shí)，即其屬于過敏性炎癥，在炎癥區(qū)有大量炎癥細(xì)胞（包括嗜酸粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、肥大細(xì)胞、嗜堿粒細(xì)胞等）浸潤。該病發(fā)病主要涉及變應(yīng)原、抗體、細(xì)胞、受體和介質(zhì)5個(gè)環(huán)節(jié)。當(dāng)過敏原激發(fā)后，在15～20分鐘所發(fā)生的速發(fā)相反應(yīng)主要與肥大細(xì)胞有關(guān)，而在激發(fā)后4～24小時(shí)所發(fā)生的遲發(fā)反應(yīng)則被認(rèn)為有嗜酸粒細(xì)胞和嗜堿粒細(xì)胞參與。這兩個(gè)時(shí)相的反應(yīng)均依賴于T淋巴細(xì)胞，特別是輔助T細(xì)胞（TH）中的一個(gè)亞型TH₂。變應(yīng)原是引起過敏性炎癥的原因，因此若能發(fā)現(xiàn)致敏變應(yīng)原種類，則對防治過敏性疾病具有重要意義。

過敏性疾病大多為I型變態(tài)反應(yīng)性疾病，是臨床多發(fā)病癥，具有季節(jié)性和區(qū)域性高發(fā)的特點(diǎn)。多因吸入塵螨、植物花粉、毛屑等變應(yīng)原或因呼吸道感染病原微生物感染而引起。

呼吸道過敏反應(yīng)最常見的典型疾病是變應(yīng)性鼻炎和支氣管哮喘。支氣管哮喘在許多國家其患病率和死亡率有增加的趨勢，如美國、英國、澳大利亞、新西蘭等國近一年內(nèi)的哮喘發(fā)生率在10-30%之間。2003年中國城區(qū)兒童哮喘患病率調(diào)查結(jié)果顯示：0-15歲兒童哮喘現(xiàn)患病率為0.12～3.34%，全國平均為1.54%；累計(jì)患病率為1.97%，與10年前（1988～1990抽樣調(diào)查，0.11～2.03%）相比明顯增加。70%患兒首次喘息發(fā)作在3歲內(nèi)；以呼吸道感染和過敏為誘因?qū)е掳l(fā)作者占94.62%，分析認(rèn)為其中部分可能為過敏性鼻炎癥狀。該調(diào)查顯示，哮喘給患兒、患兒家庭和社會(huì)經(jīng)濟(jì)造成了嚴(yán)重的影響。病人及家長醫(yī)療需求迫切。關(guān)于哮喘的誘發(fā)因素，大量研究表明，過敏是致喘的重要因素，其中塵螨、室塵、花粉較為重要。

特應(yīng)性皮炎（atopic?dermatitis,AD）是兒童期最常見的一種慢性皮膚炎癥，全世界兒童5%～20%患有特應(yīng)性皮炎，其中60%進(jìn)入青春期后仍有特應(yīng)性皮炎表現(xiàn)。將近80%患者有發(fā)生呼吸道變態(tài)反應(yīng)的危險(xiǎn)，包括變應(yīng)性鼻炎和哮喘。吸入性變應(yīng)原，包括室內(nèi)塵螨和動(dòng)物皮毛，是特應(yīng)性皮炎的潛在誘因。在一項(xiàng)雙盲對照研究中，Tan等發(fā)現(xiàn)塵螨避免可改善特應(yīng)性皮炎。由此可見，進(jìn)行皮膚點(diǎn)刺試驗(yàn)或特異性血清IgE測定對確定特應(yīng)性皮炎患者是否有氣傳變應(yīng)原變態(tài)反應(yīng)及采取合適的變應(yīng)原避免措施非常有效。

慢性蕁麻疹、濕疹是常見的復(fù)發(fā)性、過敏性皮膚病，病因復(fù)雜，往往無法根治，易復(fù)發(fā)；前者為機(jī)體接觸變應(yīng)原后發(fā)生I型或III型變態(tài)反應(yīng)及非變態(tài)反應(yīng)兩條途徑致病，后者是由內(nèi)外激發(fā)因子引起的一種遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)。其中60～80%發(fā)病與特異性變應(yīng)原有關(guān)，一次變應(yīng)原的作用是發(fā)病關(guān)鍵，若能及時(shí)檢測出患者的變應(yīng)原，對預(yù)防和治療這類疾病極有意義。

過敏性疾病變應(yīng)原的診斷方法分為體內(nèi)試驗(yàn)和體外試驗(yàn)，體內(nèi)試驗(yàn)有皮內(nèi)試驗(yàn)和點(diǎn)刺試驗(yàn)兩種方法。體外試驗(yàn)的方法主要有免疫印跡、酶聯(lián)免疫分析發(fā)、放射性免疫分析法和熒光免疫分析。

皮膚試驗(yàn)的原理是使微量無害的變應(yīng)原進(jìn)入皮膚，與皮下肥大細(xì)胞表面的特異性IgE抗體結(jié)合，經(jīng)過一系列的酶激活，使肥大細(xì)胞脫顆粒，釋放組胺等多種化學(xué)介質(zhì)，從而使局部血管擴(kuò)張、通透性增加，出現(xiàn)丘疹和紅暈反應(yīng)。臨床上根據(jù)反應(yīng)情況，對I型變態(tài)反應(yīng)性疾病的病因進(jìn)行診斷。其試驗(yàn)的方法有多種，較常用的有皮內(nèi)試驗(yàn)和皮膚點(diǎn)刺試驗(yàn)（SPT）。皮內(nèi)試驗(yàn)變應(yīng)原液是進(jìn)入真皮，而SPT變應(yīng)原液僅進(jìn)入表皮。

過敏性疾病變應(yīng)原的診斷，是一個(gè)系統(tǒng)性排除篩查試驗(yàn)，往往為了確診患者的過敏原，需要進(jìn)行幾十種疑是變應(yīng)原的篩查，初次篩查利用體內(nèi)皮膚試驗(yàn)，會(huì)給患者帶來很大不必要的痛苦。在過敏性疾病變應(yīng)原診斷的流程中，先通過體外診斷試紙條初篩確診具體變應(yīng)原，然后通過體內(nèi)試驗(yàn)確認(rèn)過敏變應(yīng)原。因此過敏性疾病變應(yīng)原體內(nèi)診斷和體外診斷的方法是相輔相成，體外診斷避免了用體內(nèi)試驗(yàn)帶來的不必要痛苦和危害。

過敏性疾病變應(yīng)原體外診斷的主要原理為變應(yīng)原與患者血清中的特異性IgE結(jié)合，然后再與酶標(biāo)、放射性同位素標(biāo)記、熒光素標(biāo)記的二抗結(jié)合，再與底物反應(yīng)，病人血清中的特異性IgE與底物反應(yīng)的強(qiáng)度成正比。