[發明專利]豬MX1基因在抗PRRS病毒中的應用

無效

• 申請號: 201310718071.0
• 申請日: 2013-12-23
• 公開（公告）號: CN103757027A
• 公開（公告）日: 2014-04-30
• 發明（設計）人: 李寧;李佳;任立明;李駿蔚
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N15/85;C12N5/10;C12N15/873;A01K67/027
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

技術領域

本發明涉及基因工程領域，具體地說，涉及豬MX1基因在抗PRRS病毒中的新功能。

背景技術

豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS），俗稱“藍耳病”是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）引起的，該病毒是巢狀病毒目動脈炎病毒科的一個成員，同屬的病毒還有馬動脈炎病毒，鼠乳酸脫氫酶酶病毒和猴出血熱病毒。該病主要引起豬的繁殖與呼吸癥狀，表現為間質性肺炎和母豬流產木乃伊胎等，每年對全世界的養豬業造成了巨大的經濟損失。2007年在中國爆發了一場高熱病，該病迅速在全國范圍擴散，超過200萬頭豬被感染，40萬頭豬死亡，該病最后證實是由一種高致病性的藍耳病毒引起的。PRRSV主要感染豬的肺泡巨噬細胞，現在研究表明在感染PRRSV后，先天免疫中PRRSV感染不能引起有效的I型干擾素應答，體液免疫不能及時產生有效的中和抗體，而且會形成抗體依賴的病毒增強效應，最終導致免疫抑制和持續感染。由于該病毒的突變率極高，傳統疫苗方法也不能有效控制該病，很多研究都致力于尋找RNAi，干擾素等新的方法來針對該病毒，用于彌補傳統方法的不足。

發明內容

為了解決現有技術中存在的問題，本發明的目的是提供一種與抗藍耳病相關的新基因MX1，及其通過對MX1基因進行過表達，從而抑制PRRS病毒在細胞中的復制。

本發明的技術方案如下：

本發明首先提供了豬MX1基因在抗PRRS病毒中的應用，其是通過MX1基因在細胞中的過表達來抑制PRRS病毒在細胞中的復制。

本發明還提供了一種過表達MX1基因的載體。

作為優選，所述載體為導入MX1基因CDS序列的pCMV-M_yc-N載體。

本發明還提供了含有所述載體的轉基因細胞。

進一步地，所述轉基因細胞為除胚胎細胞外的豬體細胞。

本發明還提供了一種制備克隆胚胎的方法，其以權利要求5所述轉基因細胞為核移植供體細胞，離體的卵母細胞為核移植受體細胞，通過核移植技術獲得克隆胚胎。

本發明還提供了利用MX1基因表達量篩選抗PRRS病毒豬的方法，所述方法為通過對豬的MX1基因的表達量進行測定，MX1表達量高的豬比MX1表達量低的豬具有更高的抗PRRS病毒感染能力。

本發明所鑒定的與抗藍耳病相關的新基因MX1(Myxovirus?resistance1)是屬于動力蛋白樣GTP酶家族。它主要負責細胞內的囊泡運輸和維持細胞器的動態平衡狀態。在許多物種中，干擾素可以刺激產生MX基因，而且MX基因是宿主抗病毒的主要成分之一。MX對于禽流感等RNA病毒具有廣譜的抗病毒作用，它可以抑制病毒在進入宿主細胞后，病毒基因組復制之前，這個早期階段的復制。有研究表明，在感染PRRS病毒后，豬肺部的MX1的mRNA表達量會上調，但是目前沒有實驗表明，過表達MX1會抑制PRRS病毒的復制。我們是第一次發現，過表達MX1可以抑制PRRS病毒在MARC145細胞中的復制。

本發明的有益效果在于：

本發明發現的新的抑制PRRSV復制的基因MX1可以有以下兩個用途：

1.分析表明，相對于沒有過表達MX1基因的細胞，過表達MX1基因的細胞可以顯著抑制PRRS病毒的復制，因此，可以通過對豬的MX1基因的表達量進行測定，MX1表達量高的豬可能會比MX1表達量低的豬更加抗PRRSV的感染，從而達到根據MX1基因的表達量高低來篩選抗PRRSV的豬。

2.可以利用轉基因等基因工程學的方法，使得MX1基因在豬中的表達量升高，從而得到MX1表達量高的豬，進而培育出抗PRRSV復制的豬。

附圖說明

圖1為本發明實施例1中轉錄組數據分析得到的MX1在通城豬和長白豬感染PRRSV的第0天，第3天，第5天和第7天肺組織中的表達模式和相對表達量；橫坐標代表時間點，縱坐標代表RPKM（相對表達量）。

圖2為本發明實施例2中原始載體pCMV-Myc-N的載體圖譜。

圖3為本發明實施例2中MARC145細胞攻毒實驗后24小時PRRSV的拷貝數；橫坐標代表對照組和攻毒組；縱坐標代表PRRSV?ORF7的相對表達量。

具體實施方式

以下實施例用于說明本發明，但不用來限制本發明的范圍。若未特別指明，實施例均按照常規實驗條件，如Sambrook等分子克隆實驗手冊（New?York:Gold?Spring?Harbor?Laboratory?Press,1989），或按照制造廠商說明書建議的條件。