[發明專利]一種檢測二化螟或大螟對轉Bt水稻敏感性的方法

無效

• 申請號: 201310717026.3
• 申請日: 2013-12-23
• 公開（公告）號: CN103688772A
• 公開（公告）日: 2014-04-02
• 發明（設計）人: 馬偉華;侯蕾蕾;張志林;王小平;雷朝亮
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: A01G7/00
• 分類號: A01G7/00;A01C1/00;A01K67/033
• 代理公司: 武漢開元知識產權代理有限公司 42104
• 代理人: 樊戎;徐紹新

技術領域

本發明涉及一種檢測二化螟或大螟對轉Bt水稻敏感性的方法。

背景技術

二化螟和大螟均屬鱗翅目，是我國水稻上危害最為嚴重的常發性害蟲，國內各稻區均有分布，但主要以長江流域及以南稻區發生較重，近年來發生數量呈明顯上升的態勢，給農業生產造成嚴重威脅。

傳統化學防治方法雖然能在短期內有效的防治蟲害，但是其環境污染、殺害天敵、破壞生態平衡和增加生產成本，所以選育抗蟲水稻是最經濟、實效的方法。從1988年，第一例轉Bt水稻研制成功后，不同類型的Bt殺蟲基因、蛋白酶抑制劑基因和植物或動物源凝集素基因不斷的轉入不同水稻品種，從而得到不同品系的抗蟲水稻。

我國選育的轉Bt水稻主要是以二化螟、大螟等害蟲為主要靶標害蟲，這類轉基因抗蟲水稻的種植可能會引起田間螟類害蟲種群抗性發生。因此，建立評估二化螟等螟類對轉基因抗蟲水稻敏感性的方法,對早期預警螟類害蟲抗性的發生顯得尤為重要。傳統的監測方法是將螟類害蟲用田間轉Bt水稻的稻桿進行飼養，通過統計死亡率來評估害蟲對轉Bt水稻的敏感性，該方法繁瑣，費時較長。

發明內容

本發明的目的在于提供一種簡便快速的檢測二化螟或大螟對轉Bt水稻敏感性的方法。

上述目的是通過以下技術方案實現的：

一種檢測二化螟或大螟對轉Bt水稻敏感性的方法，包括以下步驟：

1）取轉Bt水稻種子，用蒸餾水在37℃條件下浸泡24-48h，種子露出白色的胚芽后保濕催芽，待胚芽長至0.8-1.5cm時備用；

2）檢測水稻胚芽的Bt毒素蛋白表達量，選擇Bt毒素蛋白表達量無差異的水稻胚芽；

3）將待測二化螟或大螟初孵幼蟲與室內飼養的二化螟或大螟初孵幼蟲同時用步驟2）的水稻胚芽飼養，飼養溫度為20-30℃，相對濕度為50-80%，每天在自然光條件下飼養14小時，然后在避光條件下飼養10小時；

4）飼養5-10天后記錄活蟲數，計算死亡率，并將待測二化螟或大螟初孵幼蟲與室內飼養的二化螟或大螟初孵幼蟲進行比對，根據比對結果分析待測二化螟或大螟對Bt水稻的敏感性。

優選地，步驟3）中所述二化螟或大螟初孵幼蟲的飼養條件是溫度為26-28℃，相對濕度為60-70%。

本方法將二化螟或大螟的初孵幼蟲接在水稻胚芽上進行飼養，解決了二化螟或大螟初孵幼蟲在水稻胚芽上難以飼養成活等問題，并通過將二化螟或大螟田間種群和室內種群對轉Bt水稻的敏感性進行對比，從而快速監測室外種群對轉Bt水稻的抗性水平。該方法具有試驗周期短，操作簡便、快速等優點。

附圖說明

圖1是二化螟室內種群與田間種群對四種水稻的敏感性檢測結果。

具體實施方式

下面結合具體實施例對本發明進行詳細說明。

實施例1

一種檢測二化螟對轉Bt水稻敏感性的方法，包括以下步驟：

1）取三種轉Bt水稻種子（Cry1C、Cry2A、Cry1Ac），以明恢63水稻種子為對照，用蒸餾水在37℃條件下浸泡36h，種子露出白色的胚芽后保濕催芽，待胚芽長至1cm時備用；

2）用植物抗蟲轉基因定量檢測試劑盒（通過商業途徑購買）檢測三種轉Bt水稻胚芽的Bt毒素蛋白表達量（按試劑盒的說明書進行操作），選擇Bt毒素蛋白表達量無差異的水稻胚芽；

3）將待測二化螟初孵幼蟲與室內飼養的二化螟初孵幼蟲分別用四種水稻胚芽飼養，飼養溫度為27℃，相對濕度為60%，每天在自然光條件下飼養14小時，然后在避光條件下飼養10小時，每個實驗處理5個重復，每個重復20頭試蟲；

4）飼養7天后記錄活蟲數，計算死亡率，并將待測二化螟初孵幼蟲與室內飼養的二化螟初孵幼蟲進行比對，根據比對結果分析待測二化螟對Bt水稻的敏感性。

試驗結果如圖1所示。

結果表明，本實施例中二化螟室內種群與田間種群的死亡率基本一致，田間種群與室內種群的各處理（Cry1C,Cry2A,Cry1Ac）組沒有顯著差異，說明田間種群與室內種群在對三種轉基因水稻的抗性水平一致，即二化螟田間種群對轉Bt水稻敏感性高，沒有產生抗性。