[發明專利]一種簡并引物及利用該簡并引物檢測馬鈴薯Y病毒屬病毒的方法有效
| 申請號： | 201310716604.1 | 申請日： | 2013-12-20 |
| 公開（公告）號： | CN103642804A | 公開（公告）日： | 2014-03-19 |
| 發明（設計）人： | 章紹延;王健華;劉志昕;張雨良;余乃通;張秀春;周朋;梁潔 | 申請（專利權）人： | 中國熱帶農業科學院熱帶生物技術研究所 |
| 主分類號： | C12N15/11 | 分類號： | C12N15/11;C12Q1/70;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 鄭州聯科專利事務所(普通合伙) 41104 | 代理人： | 劉建芳;楊海霞 |
| 地址： | 571101 *** | 國省代碼： | 海南;66 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 引物 利用 檢測 馬鈴薯 病毒 方法 | ||
1.一種簡并引物，其特征在于，由正向引物和反向引物組成，正向引物的核苷酸序列為：5’-GTITGYGTKGAYGAYTTYAAYAA-3’；反向引物的核苷酸序列為：5’-GTRTGBCKYTCIGTRTYYTC-3’；其中，Y=C/T，K=G/T，R=A/G，B=G/T/C，I=次黃嘌呤。
2.利用權利要求1所述簡并引物檢測馬鈴薯Y病毒屬病毒的方法，其特征在于，包括如下步驟：以樣品總RNA為模板，利用上述引物進行Touch-down?RT-PCR反應，反應結束后凝膠電泳檢測擴增產物，在1600－1800bp位置處出現電泳條帶，則判定樣品中含有馬鈴薯Y病毒屬病毒。
3.如權利要求2所述利用簡并引物檢測馬鈴薯Y病毒屬病毒的方法，其特征在于，所述的Touch-down?RT-PCR反應包括反轉錄和Touch-down?PCR擴增兩個過程。
4.如權利要求3所述利用簡并引物檢測馬鈴薯Y病毒屬病毒的方法，其特征在于，所述反轉錄的反應溫度為42℃；所述Touch-down?PCR擴增時，第一個循環退火溫度為55℃，以后每個循環退火溫度降低1℃，共進行15個循環，然后用退火溫度40℃進行20個循環，延伸溫度為72℃。
5.如權利要求4所述利用簡并引物檢測馬鈴薯Y病毒屬病毒的方法，其特征在于，對擴增的DNA片段進行序列測定后，可鑒定馬鈴薯Y病毒屬病毒的種類。
6.權利要求1所述簡并引物應用于馬鈴薯Y病毒屬病毒Touch-down?RT-PCR通用檢測試劑盒。
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