[發(fā)明專利]一株假單胞菌Pseudomonas otitidis H3及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310716497.2
• 申請(qǐng)日: 2013-12-23
• 公開（公告）號(hào): CN103695355A
• 公開（公告）日: 2014-04-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 姚青;劉曉迪;顧振紅;朱紅惠;謝小林
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12N9/52;C12R1/38
• 代理公司: 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司 44102
• 代理人: 林麗明

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及微生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一株假單胞菌Pseudomonas?otitidis?H3及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

在現(xiàn)代農(nóng)業(yè)中，隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，大型的養(yǎng)殖場越來越多。家禽養(yǎng)殖和加工過程中產(chǎn)生的大量羽毛等角蛋白廢棄物每年在全球范圍內(nèi)可至成百上千萬噸，我國也達(dá)幾十萬噸，這對(duì)環(huán)境造成了極大的污染，同時(shí)，研究人員發(fā)現(xiàn)，角蛋白富含有大量的蛋白質(zhì)和氨基酸，對(duì)其營養(yǎng)成分的研究表明：羽毛中含粗蛋白超過80?%，各種氨基酸總量超過70?%。可見，若加以恰當(dāng)處理，羽毛等角蛋白廢棄物可達(dá)到生物轉(zhuǎn)化的目的。

????組成家禽羽毛的角蛋白是一種纖維，不可溶性的結(jié)構(gòu)蛋白，大部分以β-折疊成超螺旋結(jié)構(gòu)，多肽鏈的半胱氨酸殘基之間的二硫鍵高度緊密交叉聯(lián)結(jié)，因而機(jī)械穩(wěn)定性強(qiáng)，一般的蛋白水解酶如胃蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶都難以將其降解。

????然而，在自然界中角蛋白并未有聚積的現(xiàn)象，這表明某些特殊的微生物在發(fā)揮降解角蛋白的作用,?其原因就在于這些微生物能分泌一類酶，稱為角蛋白酶（keratinase，EC?3.4.21/24/99.11），該類酶能夠特異性地分解角蛋白，使其降解為多肽和氨基酸。自1899年Ward報(bào)道了真菌馬爪甲團(tuán)囊菌（Onygenaequina）能分解角蛋白以來，已先后發(fā)現(xiàn)30余種微生物具有降解角蛋白的能力，主要包括真菌、放線菌和細(xì)菌3類。其中，產(chǎn)生蛋白酶的細(xì)菌多來自芽孢桿菌，研究最為深入的是地衣芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌，個(gè)別菌株所產(chǎn)角蛋白酶已進(jìn)行了商業(yè)化生產(chǎn)，如地衣芽孢桿菌PWD-1（Bacillius?licheniforrmis?PWD-1）純化后角蛋白酶活性很高，商品名稱為Versazyme^TM。

????我國在羽毛角蛋白分解菌的培養(yǎng)和篩選方面的研究落后于國外，分離與篩選出的高效菌種并不多，且多是真菌與放線菌，因而篩選高產(chǎn)而且具較好穩(wěn)定性角蛋白酶新的菌群也是一個(gè)研究熱點(diǎn)。羽毛廢棄物經(jīng)過適當(dāng)處理，使廢棄的羽毛角蛋白直接轉(zhuǎn)變成蛋白質(zhì)或復(fù)合氨基酸，從而變廢為寶，既能保護(hù)環(huán)境又資源利用，這也將具有十分顯著的經(jīng)濟(jì)效益和深遠(yuǎn)的社會(huì)效益。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的上述不足，提供一株假單胞菌。

本發(fā)明的另一目的是提供上述假單胞菌的應(yīng)用。

本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)上述目的：

一株假單胞菌，分類命名為假單胞菌(Pseudomonas?otitidis)?H3，本發(fā)明中簡稱假單胞菌H3，該菌于2013年11月8日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心（CCTCC），保藏編號(hào)為CCTCC?No.?M2013558。所述中國典型培養(yǎng)物保藏中心的地址為中國湖北省武漢市武漢大學(xué)。

所述假單胞菌菌株Pseudomonas?otitidis?H3是發(fā)明人從廣東溫氏食品集團(tuán)有限公司養(yǎng)殖場采集的土樣中分離出來的。

菌株分離后經(jīng)菌落形態(tài)鑒定：該菌在平板上培養(yǎng)24h后的菌落呈淡黃色，圓形，表面濕潤粘稠，半透明，邊緣整齊；革蘭氏染色為陰性，菌體桿狀，具有周身纖毛，運(yùn)動(dòng)，無莢膜，長桿狀。

經(jīng)生理生化測定，本發(fā)明的假單胞菌H3的脲酶試驗(yàn)為陰性，氧化酶、接觸酶試驗(yàn)為陽性；能水解明膠、吐溫80，對(duì)淀粉不具水解性；能利用檸檬酸鹽；硝酸還原測定為陽性，苯丙氨酸測定為陰性。生長溫度范圍7～45?℃，以及生長pH值范圍為5.5～9.5。

該菌的16S?rDNA核苷酸序列如SEQ?ID?NO:1所示。

該菌株具有分解羽毛的功能，能夠產(chǎn)生角蛋白酶，經(jīng)測定，該菌培養(yǎng)7天后，角蛋白酶活性達(dá)18.58U/ml，因此可用于生產(chǎn)角蛋白酶的工業(yè)生產(chǎn)中，對(duì)角蛋白酶的研究和利用具有重要價(jià)值。

附圖說明

????圖1.?假單胞菌H3的透射電子顯微鏡照片(6000倍)。

????圖2.?假單胞菌H3及部分相關(guān)菌株依據(jù)16S?rDNA序列構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹。

????圖3.?假單胞菌H3降解羽毛的效果圖，其中錐形瓶H3為加入假單胞菌H3的實(shí)驗(yàn)組，錐形瓶CK為空白對(duì)照組。

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合說明書附圖和具體實(shí)施例進(jìn)一步解釋本發(fā)明，但不對(duì)本發(fā)明構(gòu)成任何限定。以下實(shí)施例中除特殊說明外，均為本領(lǐng)域常規(guī)試劑和方法步驟。

實(shí)施例1?假單胞菌H3的分離

土樣取自廣東溫氏食品集團(tuán)有限公司養(yǎng)殖場，混入雞羽毛，待羽毛分解后收集土樣，自然陰干，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>