[發明專利]一種西紅花苷Ⅰ單體、西紅花苷Ⅱ單體的分離純化方法

有效

• 申請號: 201310715404.4
• 申請日: 2013-12-23
• 公開（公告）號: CN103665060A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發明（設計）人: 陳軍;白蘭輝;夏柯;郭建華;劉丁
• 申請（專利權）人: 成都普思生物科技有限公司
• 主分類號: C07H13/06
• 分類號: C07H13/06;C07H1/08
• 代理公司: 成都天嘉專利事務所(普通合伙) 51211
• 代理人: 趙麗

1.一種西紅花苷Ⅰ單體、西紅花苷Ⅱ單體的分離純化方法，其特征在于：以鳶尾科番紅花屬的多年生花卉的干柱頭為原料，通過提取、濃縮、過濾、高效制備液相色譜分離、葡聚糖凝膠柱層析、產品回收得到西紅花苷Ⅰ單體、西紅花苷Ⅱ單體，具體工藝步驟如下：

1）提取

將西紅花粉碎成1～4mm的粗粉，按體積/質量加入40～80倍的乙醇溶液，提取3～4次，每次2～3小時，合并過濾液，待下一步處理；

所述乙醇溶液的體積百分比濃度為90～95%；

2）濃縮

將步驟1）所得的過濾液，60℃濃縮至無醇，所得濃縮液，進行下一步處理；

3）過濾

將步驟2）所得的濃縮液用0.45μm濾膜過濾，所得過濾液為制備西紅花苷Ⅰ單體、西紅花苷Ⅱ單體的原料；

4）HPLC制備

色譜條件如下：

色譜柱填料為：C₁₈填料；

流動相為：乙腈-0.35wt%磷酸水溶液V/V=25：75；

步驟3）所得的過濾液進樣，進樣量為70?mL/針，在線紫外監測，檢測波長為440nm，收集目標化合物制備溶液，得西紅花苷Ⅰ單體、西紅花苷Ⅱ單體的HPLC制備液；

5）產品回收

將步驟4）所得的HPLC制備液，回收乙腈，剩余水溶液用C18富集、甲醇解析，55℃濃縮至無醇，即分別得西紅花苷Ⅰ單體、西紅花苷Ⅱ單體溶液；

6）葡聚糖凝膠柱層析

色譜條件如下：

層析柱填料為：Sephadex?LH-20；

流動相為：甲醇-水溶液V/V=50：50；

將步驟5）所得的西紅花苷Ⅰ單體溶液、西紅花苷Ⅱ的單體溶液，分別用葡聚糖凝膠柱分離，55℃濃縮至干即分別得西紅花苷Ⅰ單體、西紅花苷Ⅱ單體產品。

2.?根據權利要求1所述的一種西紅花苷Ⅰ單體、西紅花苷Ⅱ單體的分離純化方法，其特征在于：在步驟4）進行高效液相色譜法HPLC制備前，通過液-質聯用方法確定高效液相色譜中西紅花苷Ⅰ、西紅花苷Ⅱ單體的峰形，取步驟3）所得的過濾液進樣，進行西紅花苷Ⅰ、西紅花苷Ⅱ單體的制備分離，根據質譜檢測結果，確定西紅花苷Ⅰ單體、西紅花苷Ⅱ單體在液相色譜中對應的峰形。

3.根據權利要求2所述的一種西紅花苷Ⅰ單體、西紅花苷Ⅱ單體的分離純化方法，其特征在于：所述液-質聯用方法的色譜條件如下：

色譜柱填料為：C₁₈填料；

流動相為：乙腈-0.35磷酸水溶液V/V=25：75。

4.根據權利要求1所述的一種西紅花苷Ⅰ單體、西紅花苷Ⅱ單體的分離純化方法，其特征在于：利用反相分析型液相色譜RP-HPLC復檢產品純度，其色譜條件如下：填料為C₁₈，流動相為甲醇-水溶液V/V=55：45，柱溫為30℃，流速為1.0mL/min，檢測波長為440nm。