[發明專利]少女石竹的組織培養方法

有效

• 申請號: 201310714887.6
• 申請日: 2013-12-13
• 公開（公告）號: CN103828716A
• 公開（公告）日: 2014-06-04
• 發明（設計）人: 馬懷林;王召明;高秀梅;田志來
• 申請（專利權）人: 內蒙古和信園蒙草抗旱綠化股份有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于植物生物技術領域，具體而言，涉及一種少女石竹的組織培養方法，該培養方法特別適用于少女石竹，遠優于該培養基對于其他石竹的組織培養方法，包括石竹外植體的選擇，莖尖組織培養中繼代培養基及培養代數的選擇，組織培養過程中培養條件的選擇等內容。?

背景技術

石竹是多年生作一、二年生栽培的草花，因其花色豐富，花期長，栽培管理粗放，是重要的觀賞花卉。全球約有600余種，廣布于北溫帶，主要分布于歐亞大陸，尤其是地中海地區，少數產北美和北非。據《中國植物志》記載，我國石竹屬有17個種、1個亞種、9個變種，多分布于北方草原和山區草地，大多生于干燥向陽處，有些種生于林緣或林下、荒漠及半荒漠。內蒙古水資源嚴重缺乏，景觀綠化要多用陽光少用水，應全面推廣抗旱綠化植物，而生長在內蒙古干旱、半干旱地區的石竹，有頑強的生命力，可以在野外順利越冬，在雨水少、無澆灌的情況下也能正常生長，其根系龐大，可防止水土流失并能抗有害氣體和病蟲害，有重要的衛生環保功能，可作為園林的重要組成部分，也可用于高速公路、高架公路等路基、路坡等多種場所的綠化美化。但由于來自人類活動或自然變遷兩方面的威脅，使其種群數量存在著自然退化問題并且組培擴繁種中出現玻璃花現象導致工廠化育苗數量受限。解決的辦法就是改良現有對石竹的組織培養方法，這是快速繁殖、脫毒復壯和降低玻璃花的有效方法。在實驗室條件下，降低其玻璃花是一項需實踐去摸索和探討的新課題，在制定技術方案時可以參考的資料不多，都必須通過試驗來逐一解決，關鍵要解決外植體取材部位、時期；各培養時期培養基的選擇；培養條件以及成苗后快繁技術等。本發明以開發利用，降低成本為目標，以形成工廠化、產業化生產為目的，制定相應的工作計劃和實施辦法。?

組織培養在離體培養條件下，不同植物以及同種植物不同部位的組織細胞對營養要求不同，只有滿足了它們各自的特殊要求，才能更好地生長發育。掌握培養基的配制及篩選方法是取得組培成功的關鍵環節之一。?

植物組織培養是很重要的生物技術手段。植物的細胞、莖段、葉片等均可以培養。取植物的細胞、器官和組織，置入適當培養基的容器中，在一定的培養條件下，可分化形成完整植株。作為生物技術有力手段的組織培養，日益受到重視，在農林作物的脫毒快繁、突變誘?發、細胞工程和基因工程等方面都發揮著重要作用。?

在石竹科植物的組織培養中，常選擇莖段、葉片、花瓣和莖尖等作為外植體來獲得再生植株。莖段也是石竹科植物快速繁殖中的常用材料之一，由于其具有取材方便、數量多等優點而被廣泛采用。Watad等研究了以莖段作外植體，采用凝膠培養基培養、液體搖動培養以及液體培養基上漂浮界面膜輔助培養等3種不同培養方式對香石竹再生頻率的影響，結果表明，第三種培養方式的再生頻率比另外兩種方式可提高兩至三倍，這在植物快繁過程中可大大節約成本。Godo等對剪秋羅莖段培養進行了研究，外植體在1／2MS+0.2mg／L?BA和1／2MS培養基上的再生頻率分別為30％和70％。在MS+10mg/L?BA培養基上每個莖段節點平均可以生成8個可利用芽，而且芽的遺傳穩定性相當穩定。?

石竹科植物的葉片培養可通過直接或間接再生途徑獲得再生植株。Jethwani等向培養基中加入生長素PAA對中國石竹葉片的愈傷組織進行再分化研究。結果發現，最適愈傷組織分化培養基為MS+BA(2.0，5.0mg／L)+PAA(0.5，1.0mg/L)。無論單獨或組合使用BA，NAA，2,4-D，愈傷組織都不能再分化產生芽。此外，他們還對中國石竹的第1片葉子(從頂部開始)和第2片葉子的愈傷組織誘導情況做了比較，研究表明第1片葉子和第2片葉子基部誘導出的愈傷組織具有再生能力，而第2片葉子其余部分誘導的愈傷組織不具有再生能力。Kantia等研究報道：中國石竹葉片外植體在3mg／L?BA+0.5mg/L?NAA和3mg/L?BA+1mg/L?NAA的MS基本培養墓上培養，都會直接產生不定芽；而在0.5mg/L?BA+1mg/L2,4-D的MS培養基上雖也可以產生不定芽，但伴隨有愈傷組織的產生，產生的不定芽要在含BA和NAA的培養基上才能生長。Paresk等以香石竹、中國石竹和美國石竹的葉片為外植體，采用MS+1mg／L2,4-D液體培養基誘導出了體細胞胚，體細胞胚在MS+1mg／L?GA3固體培養基上發育成幼苗，首次建立了石竹科植物直接體細胞胚誘導再生體系。?