[發明專利]D-3-羥丁酸酶法檢測試劑盒及其制備方法

有效

• 申請號: 201310714654.6
• 申請日: 2013-12-23
• 公開（公告）號: CN104730230A
• 公開（公告）日: 2015-06-24
• 發明（設計）人: 景晟;孫衛兵;張躍建
• 申請（專利權）人: 上海復星醫藥(集團)股份有限公司;上海復星長征醫學科學有限公司
• 主分類號: G01N33/52
• 分類號: G01N33/52;G01N21/78;G01N21/31
• 代理公司: 上海新天專利代理有限公司 31213
• 代理人: 王巍

技術領域

本發明涉及生物試劑，具體涉及一種檢測試劑盒,尤其涉及一種酶法檢測D-3-羥丁酸的試劑盒及其制備方法。

背景技術

D-3-羥丁酸是血中酮體的主要成份（占78％），可以反映酮體生成的情況。當酮癥酸中毒時，D-3-羥丁酸明顯升高，因而，D-3-羥丁酸可用于酮癥酸中毒早期診斷與治療監控，并可指導糖尿病的滅酮治療及療效監控。在酮癥酸中毒時，患者對胰島素產生拮抗作用，導致蛋白質合成障礙和蛋白質講解代謝，這就可通過測定早晨空腹血糖，來了解嚴重損傷、急重疾病、敗血癥以及營養支持的病人體內脂肪蛋白質的動員情況。對減肥、限食或妊娠嘔吐者，測定D-3-羥丁酸有助于監測饑餓酮癥酸中毒的發生。

一般，D-3-羥丁酸測定方法有酶法、氣相色譜法、放射化學法、毛細管等速電泳法等。放射化學方法由于輻射,化學物質難以接受,毛細管等速電泳操作時間長,操作復雜，不適合臨床應用。酶法試劑配成液體試劑后不能長期保存,而且酶的價格很昂貴，難以大量使用，因此，需要改進測定方法。D-3-羥基丁酸測定有顯色法，氣相色譜法，放射化學法，毛細管等速電泳法等。D-3-羥基丁酸測定有顯色法，氣相色譜法，放射化學法，毛細管等速電泳法等。

本實驗采用酶動力學法來測定血液或血清中的D-3-羥丁酸。在D-3-羥丁酸脫氫酶的催化作用下，D-3-羥丁酸被氧化，生成乙酰乙酸，同時NAD⁺被還原為NADH，NADH在340nm處有最大吸收峰，其吸光度值與D-3-羥丁酸的濃度呈正相關。通過添加D-3-羥丁酸脫氫酶穩定劑，從而使D-3-羥丁酸試劑盒成本大大降低，滿足臨床使用的要求。

糖尿病酮癥酸中毒是一臨床常見病，多發病，原因是血酮體增高引起，D-3-羥基丁酸酮體重要組成部分，占酮體總量70％，酮癥診斷治療不及時將有生命危險，D-3-羥基丁酸測定有顯色法，氣相色譜法，放射化學法，毛細管等速電泳法等。糖尿病酮癥酸中毒是一臨床常見病，多發病，原因是血酮體增高引起，D-3-羥基丁酸酮體重要組成部分，占酮體總量70％，酮癥診斷治療不及時將有生命危險，D-3-羥基丁酸測定有顯色法，氣相色譜法，放射化學法，毛細管等速電泳法等。糖尿病酮癥酸中毒是一臨床常見病，多發病，原因是血酮體增高引起，D-3-羥基丁酸酮體重要組成部分，占酮體總量70％，酮癥診斷治療不及時將有生命危險，D-3-羥基丁酸測定有顯色法，氣相色譜法，放射化學法，毛細管等速電泳法等。

發明內容

本發明所要解決的技術問題在于克服上述不足之處，研究設計采用酶動力學法的試劑，測定血液或血清中的D-3-羥丁酸。

本發明提供了一種酶法檢測D-3-羥丁酸試劑盒，該試劑盒由下列試劑1和試劑2，按3份：1份的比例組成：

試劑1：（3L）（試劑體積）

試劑2：（1L）（試劑體積）

所述試劑1的緩沖液選自TRIS（三羥甲基氨基甲烷）tris(hydroxymethyl)aminomethane）、MOPS（3-(N-嗎啉)丙磺酸3-(N-morpholino)propanesulfonic?acid）、BICINE(N,N-雙(2-羥乙基甘氨酸)或HEPES（4-羥乙基哌嗪乙磺酸4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic?acid）。

所述Synperonic（聚氧丙烯聚氧乙烯共聚物）為F108、F127或F68，優選F108。

本發明的檢測D-3-羥丁酸試劑盒，在使用時,試劑1加檢測樣本后再加入試劑2,即可進行檢測。

本發明的另一目的是提供了上述D-3-羥丁酸試劑盒的制備方法：

該方法包括下列步驟：

(一)制備試劑1:（3L）（試劑體積）

（1）先向容器內加入為總量80%的去離子水；

（2）依次加入緩沖液、D-3-羥丁酸脫氫酶、聚氧丙烯聚氧乙烯共聚物、疊氮鈉;

（3）加入D-3-羥丁酸脫氫酶;

（4）最后加入剩余量的去離子水至總體積為3L混合均勻，即得;

(二)制備試劑2:（1L）（試劑體積）

向容器內依次加入草酸鹽、氧化型輔酶、疊氮鈉，去離子水加至總體積為1L混合均勻，即得。