[發明專利]提高三甲硅醚衍生化-GC/MS測定氣溶膠中糖類和羧酸化合物精密度和準確性的方法

無效

• 申請號: 201310714308.8
• 申請日: 2013-12-20
• 公開（公告）號: CN103645271A
• 公開（公告）日: 2014-03-19
• 發明（設計）人: 李黎;蒲金國;莫恒勤;周易;賴瑋;伍鈞;鄧仕槐
• 申請（專利權）人: 四川農業大學
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 龔燮英

技術領域

本發明屬于氣溶膠成分測定技術領域，特別涉及一種三甲硅醚衍生化-GC/MS測定氣溶膠中糖類和羧酸化合物的方法及提高其測定精密度和準確性的方法。?

背景技術

三甲硅醚衍生化-GC/MS測定是對極性化合物（主要是糖類和羧酸化合物）測定的一種快速有效的方法。它在對化合物的定性測定方法上有非常明顯的優勢。但在定量測定上，仍存在一些問題，主要是樣品中吡啶對色譜柱的影響，導致在對某些樣品進行測定時，會出現衍生化效果不佳，或者峰形欠佳，影響定量的精密度和準確性。?

現有的三甲硅醚衍生化-GC/MS測定糖類和羧酸化合物的方法通常如下：首先將一定量的內標（內標通常為氘代蘋果酸和β-甲基木糖吡喃糖）加到氣溶膠樣本上，接著將樣本剪碎，加入二氯甲烷和甲醇的混合溶劑提取，提取之后將樣品在旋轉蒸發儀上濃縮至1-2ml，然后在柔和的氮氣下吹干。之后加入BSTFA：TMCS=99:1（v/v）的商品衍生化試劑與吡啶的2:1的混合物在70℃下反應1h。衍生化后的溶液在24h內注入GC/MS進行分析測定。?

上述經典的三甲硅醚衍生化-GC/MS測定糖類和羧酸化合物的方法在進行定量分析時存在以下問題：1）衍生化中必須加入吡啶作為催化劑，但衍生化產物中含有吡啶會明顯地損傷色譜柱，引起色譜柱的明顯柱流失，從而使測定的重現性和準確性受到質疑；2）衍生后產物為半揮發性產物，在開瓶取樣測定過程中，?會有一部分的產物由于滯留在氣相中而散失。從而導致平行樣品中內標化合物的峰面積變化較大，影響平行樣的測定精密度。?

發明內容

本發明鑒于以上測定方法出現的一些問題，相對應的采取一些措施，經試驗驗證，改進后的方法對樣品測定的準確性和精密度的提高有明顯的改進，可做到重復進樣，化合物濃度的精密度變化一般小于10%。本發明的目的在于提供一種提高三甲硅醚衍生化-GC/MS測定氣溶膠中糖類和羧酸化合物測定精密度和準確性的方法。?

本發明提供的提高三甲硅醚衍生化-GC/MS測定氣溶膠中糖類和羧酸化合物精密度和準確性的方法，包括如下步驟：?

1）衍生化反應結束后，將密閉的衍生化瓶放置在冰水浴中振蕩30min以上，以確保瓶內的樣品衍生化產物冷卻到室溫；?

2）樣品進樣前加入1:1體積的正己烷進行稀釋，是為了減少樣品中吡啶的含量，減少吡啶對色譜柱的損傷；?

3）在色譜柱前增加一段玻璃預柱，預柱可起到隔離衍生化產物中吡啶的效果。?

本發明提供的三甲硅醚衍生化-GC/MS測定氣溶膠中糖類和羧酸化合物的方法，步驟如下：?

1、取3～15cm²的石英濾膜，所述石英濾膜已采集了含測定目標化合物顆粒物樣本，然后將石英濾膜剪碎放入錐形瓶中，加入內標，所述內標為氘代蘋果酸和β-甲基木糖吡喃糖；?

2、接著，向錐形瓶中加入二氯甲烷：甲醇為2:1（體積比）的提取液，在室溫下進行超聲提取；提取時，加入提取液提取30min后，超聲液靜置數分鐘，然?后將上清液轉移至一雞心瓶內，依照上述方法重復超聲提取3次，合并提取液于雞心瓶內；?

3、提取液在旋轉蒸發儀上（真空度：0.08MPa，40℃）蒸發濃縮至1～2ml，濃縮液經0.22μm的PTFE（聚四氟乙烯）針頭過濾，再轉移至一衍生化反應瓶中，并于柔和氮氣下將樣品吹干；?

4、接著，向衍生化反應瓶中加入商品衍生化試劑與吡啶的2:1（體積比）的混合物，所述商品衍生化試劑為體積比為99:1的N,O-雙(三甲硅醚)-三氟乙酰胺（BSTFA）和三甲基氯硅烷（TMCS）的混合物（BSTFA：N,O-雙(三甲硅醚)-三氟乙酰胺，N,O-bis(trimethylsilyl)-trifluroacetamide，TMCS：三甲基氯硅烷，trimethylchlorosilane），于恒溫加熱器中70℃反應1h；?

5、衍生化反應結束后，將密閉的衍生化瓶放置在冰水浴中振蕩30min以上，以確保瓶內的樣品衍生化產物冷卻到室溫；?

6、樣品進樣前加入1:1體積的正己烷進行稀釋，是為了減少樣品中吡啶的含量，減少吡啶對色譜柱的損傷；?

7、在色譜柱前增加一段玻璃預柱，預柱可起到隔離衍生化產物中吡啶的效果；?

8、步驟6稀釋后的樣品振蕩搖勻后，取適量溶液（例如1μl）進行GC/MS檢測。?

本發明技術方案帶來的有益效果：?