[發明專利]一種前列腺腫瘤標志物免疫傳感器的制備方法及應用

有效

• 申請號: 201310713154.0
• 申請日: 2013-12-23
• 公開（公告）號: CN103675279A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發明（設計）人: 李月云;韓健;魏琴;董云會;任祥;陳潤海
• 申請（專利權）人: 山東理工大學
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/531
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種前列腺腫瘤標志物免疫傳感器的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

（1）二抗標記物Ag@NH₂-MCM-48/Ab₂的制備，取0.5～1.5mg銀雜化的NH₂-MCM-48介孔材料溶于1mL、pH=7.4的磷酸鹽緩沖溶液中，超聲1～3h使其分散均勻，再加入1～3mL、10～20μg/mL的前列腺特異抗原二抗，4°C震蕩12～24h，離心后除去上清液，得到二抗標記物Ag@NH₂-MCM-48/Ab₂；

（2）免疫傳感器的制備，以玻碳電極為工作電極，先用氨基化石墨烯—二茂鐵甲醛復合材料水溶液修飾玻碳電極表面，后修飾上戊二醛，再用前列腺特異抗原一抗溶液進行修飾，再滴涂牛血清白蛋白溶液后，繼續修飾前列腺特異抗原，最后修飾Ag@NH₂-MCM-48/Ab₂后，即得前列腺腫瘤標志物免疫傳感器。

2.如權利要求1所述的一種前列腺腫瘤標志物免疫傳感器的制備方法，其特征在于：步驟（2）中氨基化石墨烯—二茂鐵甲醛復合材料的制備步驟如下：

1）室溫下，將100～150mg氧化石墨烯分散在40～60mL乙二醇中，超聲分散均勻，攪拌下滴加濃氨水1.0～1.5mL，得到黑棕色溶液，轉移到聚四氟乙烯高壓釜，150～180°C反應6～10h，冷卻后離心，去掉上清液，用超純水洗滌3次后，再在65°C干燥箱內干燥，得到氨基化石墨烯；

2）將0.8～1.2mg氨基化石墨烯和1.0～1.5mg二茂鐵甲醛分散于1mL、質量分數為0.5%～1.0%的羧甲基殼聚糖溶液中，震蕩12h～24h，即得氨基化石墨烯—二茂鐵甲醛復合材料。

3.如權利要求1所述的一種前列腺腫瘤標志物免疫傳感器的制備方法，其特征在于：步驟（1）中銀雜化的NH₂-MCM-48介孔材料的制備步驟如下：

1）將1.0～1.5g正硅酸四乙酯加入錐形瓶中，加超純水62～95mL攪拌10min后，加入氫氧化鉀0.5～1.0g，再一次性加入十六烷三甲基溴化銨0.65～1.5g，攪拌30～40min后轉入高壓釜，120°C水熱晶化62～72h，所得白色粉末依次用超純水和乙醇分別徹底清洗后，室溫干燥，然后在馬弗爐中以1°C/min的速度程序升溫至550°C，保溫6～8h，即得到MCM-48；

2）取1.0g?MCM-48和1mL3-氨丙基三乙氧基硅烷溶于80～90mL無水甲苯中，70°C回流1.5～2h，離心后于110°C干燥1～2h，得到粉末狀的NH₂-MCM-48；

3）在錐形瓶加入48mL超純水，在攪拌下加入1mL濃度為50mmol/L硝酸銀溶液和1mL質量分數為5～8%的檸檬酸鈉溶液，再加入5～10mg硼氫化鈉固體持續攪拌10min，直至顏色不再變化。

4）將20mg?NH₂-MCM-48加入到上述溶液中，離心，除去上清液，再在35°C真空干燥，制得銀雜化的NH₂-MCM-48介孔材料。

4.如權利要求1所述的一種前列腺腫瘤標志物免疫傳感器的應用，其特征在于應用于前列腺特異抗原的檢測。