[發明專利]一種石蒜中加蘭他敏的提取方法

有效

• 申請號: 201310712971.4
• 申請日: 2013-12-23
• 公開（公告）號: CN104059078A
• 公開（公告）日: 2014-09-24
• 發明（設計）人: 田春蓮;王鵬;劉小攀;肖卓炳
• 申請（專利權）人: 吉首大學
• 主分類號: C07D491/107
• 分類號: C07D491/107
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種加蘭他敏提取方法，特別涉及一種石蒜中加蘭他敏的提取方法。

背景技術

石蒜(Lycoris radiate.Herb)是石蒜科(Amaryllidaceae)石蒜屬(Lycoris)的多年生草本植物，主要分布在亞洲，我國有17種，在我國湖南、湖北、江蘇、浙江、福建等省均有分布。石蒜屬植物具有較高的觀賞價值，被譽為“中國郁金香”，石蒜鱗莖富含淀粉，如將其磨碎后用大量水淘洗，脫毒后食用，味如糯米粉，《救荒本草》中記載，可將其炒熟，水浸過食。石蒜性味辛、甘、溫，具有消腫、殺蟲的作用，其所含豐富的生物堿也得到廣泛應用，尤其是加蘭他敏，隨著人口老齡化的嚴重加劇，阿爾茨海默病(AD)造成的疾病負擔日益增加，而石蒜鱗莖中的加蘭他敏因毒副作用小、療效顯著的優勢是目前被美國FDA認可的抗AD藥物之一，國內外需求量巨大；其次，它還可用于閉角型青光眼、術后腸肌麻痹、脊髓灰質炎引起的癱瘓、重癥肌無力的治療。石蒜是加蘭他敏原料藥的植物來源之一，但含量低，其提取通常采用溶劑的抽提方法，提取較為耗時，并且資源浪費、環境污染嚴重，因此提供一種新的加蘭他敏的提取方法就顯得尤為重要。

發明內容

為解決上述現有技術的問題，本發明提出一種石蒜中加蘭他敏的提取方法，為達到上述目的，本發明的技術方案為：

一種石蒜中加蘭他敏的提取方法，包括如下步驟：

步驟一、色譜條件的確定：色譜柱：Kromasil100-5C₁₈反相柱(250mm×4.6mm，5μm)；流動相：乙腈-磷酸緩沖液(17∶83)，柱溫：35℃，進樣量20μL，檢測波長：290nm；磷酸緩沖液為2.72g磷酸二氫鉀溶于100mL水中加入1.4mL三乙胺定溶至1L，其pH值為7.02；

步驟二、標準曲線的制備：分別稱取25mg加蘭他敏及25mg石蒜堿標準品，定容，配成1.0mg/mL的加蘭他敏及1.0mg/mL的石蒜堿標準溶液，各取0.05、0.1、0.2、0.5、1、2、5mL加蘭他敏及石蒜堿標準溶液定容于10mL容量瓶中配成質量濃度為0.005、0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5mg/mL的混合標準溶液，用0.45μm的微孔濾膜過濾后，按上述色譜條件測定，得回歸方程；

步驟三、加蘭他敏的提取：稱取石蒜粉末2.0g，加入纖維素酶和果膠酶，加入pH＝4.5的水溶液在一定溫度條件下浸提一定時間，5000r/min離心20min，取上清液，采用色譜測定，計算加蘭他敏得率。

步驟三中，所述加蘭他敏得率的計算公式為

y=cvm0×100%]]>

式中：c為加蘭他敏的質量濃度/(mg/mL)；V為提取液定容體積/mL；m₀為石蒜粉末的質量/mg。

步驟三中加蘭他敏的提取條件為：浸提溫度50℃、浸提時間2.0h、加酶量4％、提取劑選取pH＝4.5的水溶液。

相對于現有技術，本發明的有益效果為：本發明采用pH為4.5的水作為提取溶劑，提取溶劑中加入4％的纖維素酶與果膠酶的復合酶，通過浸提法得到加蘭他敏提取得率為0.0294％。該工藝石蒜加蘭他敏提取成本低、提取時間短，工藝簡單，對環境無污染，提取得率較高。

附圖說明

圖1酶種類對得率的影響，其中1纖維素酶、2半纖維素酶、3果膠酶。

圖2pH對得率的影響。

圖3酶用量對得率的影響。

圖4浸提時間對得率的影響。

圖5溫度對得率的影響。

圖6料液比對得率的影響。

具體實施方式

下面結合具體附圖及試驗例對本發明方法做進一步詳細說明：

1材料與方法

1.1材料與試劑

石蒜于2012年3月采自湖南省懷化市沅陵縣官莊。

加蘭他敏標準品(純度＞98％)中國食品藥品鑒定研究院；石蒜堿標準品(純度＞98％)上海金穗生物科技有限公司；纖維素酶淮安市百麥綠色生物能源有限公司果膠酶如吉生物科技甲醇、乙腈(均為色譜純)美國Tedia公司；濃硫酸、磷酸二氫鉀、三乙胺均為分析純。