[發明專利]一種預測強直性脊柱炎易感性的方法和試劑

無效

• 申請號: 201310712944.7
• 申請日: 2013-12-20
• 公開（公告）號: CN103710447A
• 公開（公告）日: 2014-04-09
• 發明（設計）人: 楊澤;朱小泉;楊帆;孫亮;史曉紅;唐雷;原慧萍;張玉榮;趙承孝;趙帆;王娜娜;惠娟;張政
• 申請（專利權）人: 衛生部北京醫院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京正理專利代理有限公司 11257
• 代理人: 李欣

技術領域

本發明涉及一種預測強直性脊柱炎易感性的方法和試劑，更具體的說是通過測定與AS相關基因SKIV2L的多態性預測受試者對于強直性脊柱炎的易感性，該方法可用于疾病的輔助診斷、治療和新藥開發，屬于生物技術領域。

背景技術

強直性脊柱炎（Ankylosing?spondylitis，AS）是一種自身免疫性疾病，多發于16-40歲的青壯年，男女患病比例約為4～10:1。病變常首先發生于骶髂關節，少數重癥患者表現為整個脊柱強直。此外，部分患者伴有不同程度的髖關節、眼、肺、心血管、腎等脊柱外病變。AS在白種人群中的發病率約為1%～3%，我國AS患病率約為0.2-0.6%，其中60%以上的患者伴有髖關節受累，致使20%以上AS患者殘疾，炎癥主要累及關節囊、肌腱和韌帶的骨附著點，導致局部關節粘連強直，活動受限。臨床上至今尚缺乏可明顯緩解和控制疾病發展的藥物。AS屬多基因疾病，具有明顯的遺傳傾向，雖然通常認為遺傳與免疫因素在AS發病中起主導作用，但確切的病因與發病機制仍不清楚。

目前進行AS遺傳病因研究，多采用SNP作為基因組標志的關聯分析方法，是有效的，已得到證明。SNP是指染色體基因組水平上單個核苷酸變異引起的DNA序列多態性，在人群中的頻率需>1%，SNPs是雙等位基因標記，這種單堿基變化中有70.1%為同型堿基之間的轉換：如G/A或T/C，29.1%為發生在嘌呤和嘧啶之間的顛換。C（胞嘧啶）是人類基因組中最易發生變化的位點，因為大多數是甲基化胞嘧啶，能夠自發脫氨基轉換為T（胸腺嘧啶），SNP包含了已知多態性的80-90%，是最常見的遺傳變異。

由于生存的選擇壓力導致SNP在單一基因和整個基因組中的分布呈不均勻性。SNPs在基因非編碼區的數量是編碼區的4倍，總數可達3百萬個。SNP以其密度高（平均每1kb就有1個）、代表性強（位于基因內部的SNP可能直接影響蛋白質結構或表達水平）、遺傳穩定性好（同微衛星多態性比較而言）、易于自動化分析（因SNP在人群中多為雙等位基因標記，可簡單以“＋/－或1/0”直接分型）等特點成為很好的遺傳標志。

1973年，Brewerton等首先發現了與AS強相關的人類白細胞抗原-B27（HLA-B27）。隨著研究的進展，與AS相關的其他易感基因如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白介素-1（IL-1）陸續被識別。

SKIV2L（superkiller?viralicidic?activity2-like，抗病毒超級殺傷活動因子2）基因位于6p21.3，全長1056bp，含有21個外顯子，其編碼產物是一種蛋白，該基因定位于人類白細胞抗原III區域，與免疫反應及自身性免疫疾病發生發展等密切相關。

目前尚無任何關于SKIV2L基因與AS相關聯的研究結果。

發明內容

本發明的主要目的是提供一種預測強直性脊柱炎易感性的方法。

本發明的第二個目的是提供一種預測強直性脊柱炎易感性的試劑盒，包括PCR引物和含有該引物的試劑盒。

為實現上述目的，本發明采用以下技術方案：

檢測強直性脊柱炎易感性的核酸序列，為序列表SEQ?ID?No.1所示堿基序列。其+438位即是變異位點，以字母“R”標示出。該核酸序列為SKIV2L基因全長序列。圖1為SKIV2L基因結構及其多態性變異位點的示意圖，附圖中包含有3個外顯子，rs144147284位點標在SKIV2L基因圖中第16外顯子區的相應位置。

一種檢測強制性脊柱炎易感性的方法，檢測受試者SKIV2L基因第16外顯子區rs144147284位點的基因型，基因型為GG時，受試者的易感性最低；攜帶A等位基因時，受試者的易感性升高。

一組檢測強直性脊柱炎易感性的引物，能擴增得到所述的檢測強直性脊柱炎易感性的核苷酸序列SEQ?ID?No.1，引物的核苷酸序列分別為序列表SEQ?ID?No.2和序列表SEQ?ID?No.3所示。

本發明提供了一種檢測強直性脊柱炎易感性的診斷試劑盒，其中含有本發明特異性擴增SKIV2L基因rs144147284的引物對和用于PCR擴增檢測的試劑盒的常規組件、試劑、緩沖液等，本領域技術人員熟知這些常規組件和檢測方法。本發明試劑盒中的全部組分、含量如下：

一種檢測強直性脊柱炎易感基因的試劑盒，由以下試劑組成：

（1）10μL10×PCR緩沖液；

（2）2μL10mMdNTP混合液；