[發(fā)明專利]三氯生衍生物及其用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310712293.1
• 申請日: 2013-12-20
• 公開（公告）號: CN103882091B
• 公開（公告）日: 2019-06-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 理查德·博維爾;吉馬·豪斯
• 申請（專利權(quán)）人: 奧克索伊德有限公司
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04;C12N1/20;C12N1/16;C12N1/14
• 代理公司: 北京德琦知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11018
• 代理人: 王峰;王珍仙

一種用于選擇性抑制在靶細(xì)胞和非靶細(xì)胞的混合群體中的非靶細(xì)胞的包含三氯生衍生物的選擇劑。優(yōu)選地，所述三氯生衍生物是糖苷衍生物，更優(yōu)選地是吡喃糖苷衍生物。合適地提供了包含所述選擇劑的選擇性培養(yǎng)基以及使用所述選擇劑培養(yǎng)細(xì)胞的方法。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及三氯生衍生物及其用途，特別是包含三氯生衍生物的選擇劑和含有三氯生衍生物的選擇性培養(yǎng)基。本發(fā)明還涉及使用包含三氯生衍生物的選擇劑選擇性抑制混合群體中的特定細(xì)胞的生長的方法以及用于進(jìn)行此類方法的試劑盒。

背景技術(shù)

對本發(fā)明背景的下列論述旨在促進(jìn)對本發(fā)明的理解。然而，應(yīng)理解，該論述不是認(rèn)可或承認(rèn)提及的任何材料在本申請的優(yōu)先權(quán)日期時在任何權(quán)限下被公布、為人所知或是本領(lǐng)域技術(shù)人員的常見一般知識的一部分。

廣譜抗微生物劑5-氯-2-(2,4-二氯苯氧基)苯酚（也稱為“三氯生”或其是Ciba Specialty Chemical的三氯生的商標(biāo)名）自19世紀(jì)70年代早期開始已常用于個人衛(wèi)生用品（包括肥皂、牙膏、除臭劑）以及用于家用和工業(yè)清潔產(chǎn)品。盡管在高濃度下三氯生是殺蟲劑，其在較低水平下起抑菌劑的作用。

盡管有抗微生物用途的悠久歷史，但是三氯生通常不單獨用作區(qū)分培養(yǎng)基中用于特定細(xì)菌物種的優(yōu)先生長的選擇劑。Toora的美國專利5447849教導(dǎo)了頭孢磺啶和三氯生的組合用于選擇性生長小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌的用途。Russell的美國專利5741663教導(dǎo)了與羧芐青霉素和呋喃妥因組合的三氯生用于選擇性生長熒光假單胞菌的用途。Good等人的美國專利申請公布2010/0278847教導(dǎo)了將100nM至10μM范圍內(nèi)的三氯生添加至培養(yǎng)基（其還補(bǔ)充有氨芐青霉素）以用于區(qū)分基因改造的（轉(zhuǎn)化的）大腸桿菌，所述大腸桿菌顯示載體介導(dǎo)的對于烯?；?ACP還原酶（fab1）基因的表達(dá)。Good等人沒有公開涉及通常在環(huán)境、工業(yè)或醫(yī)學(xué)樣本中發(fā)現(xiàn)的類型的天然存在的細(xì)菌和/或真菌的培養(yǎng)物。

發(fā)明內(nèi)容

根據(jù)本發(fā)明的第一方面提供了用于選擇性抑制靶細(xì)胞和非靶細(xì)胞的混合群體中的非靶細(xì)胞的包含三氯生衍生物的選擇劑。

在整篇說明書和權(quán)利要求書中，除非上下文另有需要，否則應(yīng)理解詞語“包括（comprise）”或變型諸如“包含（comprises）”或“包含（comprising）”意味著包含所述的整數(shù)或整數(shù)組而不排除任何其它整數(shù)或整數(shù)組。

混合群體為在環(huán)境、工業(yè)和/或臨床樣本中發(fā)現(xiàn)的類型。可在無其它抗生素、抑制染料、生物殺滅劑或抑菌劑的情況下使用所公開的三氯生衍生物。采集時微生物存在的條件以及運輸環(huán)境、工業(yè)和/或醫(yī)學(xué)樣本的條件一般是受脅迫（stressed，應(yīng)激）的和潛在危害性的。因此，樣本中的靶微生物可具有對抗生素和其它抑制劑的減弱的抗性，并且在恢復(fù)正常生長之前往往需要延長的遲滯期。很多實驗室的標(biāo)準(zhǔn)實踐是使樣本在不含抗生素的營養(yǎng)生長培養(yǎng)基中經(jīng)受預(yù)富集培養(yǎng)一段足以促進(jìn)靶微生物恢復(fù)的時間，例如約16小時。然而，靶細(xì)胞往往以低于非靶微生物的數(shù)量存在并且預(yù)富集培養(yǎng)可加劇這種不平衡，導(dǎo)致非靶微生物的生長過度以及掩蔽靶微生物。

因為本發(fā)明的三氯生衍生物和含有此類三氯生衍生物的組合物允許在無抗生素或其它生物殺滅劑下培養(yǎng)，所以對于大多數(shù)樣本來說，排除預(yù)富集培養(yǎng)的需要，這樣節(jié)省了時間，并且減少與進(jìn)行預(yù)富集恢復(fù)培養(yǎng)的額外處理樣本相關(guān)的風(fēng)險。

本發(fā)明還提供三氯生衍生物作為用于選擇性抑制靶細(xì)胞和非靶細(xì)胞的混合群體中的非靶細(xì)胞的選擇劑的用途。

本文所用的關(guān)于三氯生的術(shù)語“衍生物”一般是指直接或通過修飾或部分取代由三氯生衍生的化學(xué)物質(zhì)。

細(xì)胞可以是真核細(xì)胞（例如哺乳動物細(xì)胞、真菌細(xì)胞或酵母細(xì)胞），但是更通常是細(xì)菌細(xì)胞。特別地，所述靶細(xì)胞和所述非靶細(xì)胞通常均包含細(xì)菌。