[發明專利]一種水性膠層析介質及用于檢測的方法

有效

• 申請號: 201310710675.0
• 申請日: 2013-12-20
• 公開（公告）號: CN103706340A
• 公開（公告）日: 2014-04-09
• 發明（設計）人: 李勇;王紅梅;段生寶;田晶晶;丁少華;陳曄洲;李東
• 申請（專利權）人: 中國科學院蘇州生物醫學工程技術研究所
• 主分類號: B01J20/281
• 分類號: B01J20/281;G01N33/80;G01N33/531
• 代理公司: 蘇州廣正知識產權代理有限公司 32234
• 代理人: 劉述生

技術領域

本發明涉及醫學檢測領域，特別是涉及一種水性膠層析介質及用于檢測的方法。

背景技術

不完全抗體（主要為IgG類抗體）與紅細胞相應抗原結合后（致敏紅細胞）在鹽水介質中不出現肉眼可見的凝集反應，但在加入抗-IgG的抗體(二抗)后，該二抗與致敏紅細胞上不完全抗體的Fc段結合，得以搭橋，出現凝集反應，該試驗稱為抗人球蛋白試驗（anti-human?globulin?test?or?Coombs?test），在臨床常規的抗體篩檢、鑒定以及交叉配血中，要求對具有輸血史、妊娠史及輸用過血液制品的受血者和供血者都應進行不完全抗體檢測。臨床上保障安全輸血，診斷新生兒溶血病、自身免疫性溶血病、藥物免疫溶血性疾病等以及血型學研究工作中，對不完全抗體的檢測是最重要內容之一。對此，傳統的試管抗人球蛋白試驗1945年發明，沿用至今只能應用于少量標本的確證實驗，由于其繁瑣的操作使其始終未成為臨床常規檢測手段；目前應用最多的微柱凝膠抗人球蛋白實驗，這不需要洗滌過程，但存在著試劑價格高，血液標本中纖維蛋白原容易產生假陽性的缺點；此外，各種“增強實驗”，包括蛋白酶、白蛋白、聚凝胺等，都因為各自缺點也沒能成為檢測血型不完全抗體的可靠方法。

1945年科學家Coombs?RRA等根據一些病人的病癥，確信他們的血液中應該有抗患者紅細胞的凝集素，但將這些血清與紅細胞混合后并未出現凝集反應，而當加入人血清抗體（抗人球）后，以其搭橋則出現凝集反應，最初此方法只用于檢測血清中不完全抗體，經過發展同樣用于檢測病人體內已經結合了抗體和/或補體的紅細胞，即經典的Coombs?test，前者為間接抗人球蛋白實驗，后者為直接抗人球蛋白實驗，經典的Coombs?test理應是現在和將來對不完全抗體檢測的確定性、標準性試驗，發明之初也被希望能應用于臨床常規不完全抗體檢測以及出紅細胞以外的其他小分子抗原抗體檢測，但由于抗人球與血清中致敏紅細胞的抗體及血清中游離的免疫球蛋白都能結合，因此在常規的試管Coombs?test時首先要洗滌去除未與紅細胞結合的游離免疫球蛋白，再加入抗人球，這樣避免抗人球被反應液中非特異性的免疫球蛋白中和而出現的假陰性反應，這需要生理鹽水離心洗滌至少三次以上，使反應液中非特異性的免疫球蛋白殘余要少于原量的1/5000，由此導致其操作繁瑣費時，且一些弱反應抗體不能檢出等缺點，不能滿足臨床進行血型相容性試驗時間性要求，故此方法始終未能成為臨床常規檢測項目。為解決這一難題人們發展出了一些增強介質如聚凝胺（polybrene）、聚乙二醇（polyethylene?glycol，PEG）、低離子強度溶液（low?ionic?strength?saline，LISS）以及酶液等，利用這些介質的技術都可以減少或避免洗滌程序、減少孵育時間并增強抗原抗體反應，但同樣存在一些缺點：如聚凝胺法易引起假陰性，操作過程不易規范化；以PEG為介質的試驗中，抗人球蛋白試劑中的抗補體成分會導致假陽性反應；有些抗體（抗-K）在低離子溶液中與紅細胞結合量要比在正常鹽水中要少的多，所以在低離子溶液中進行試驗時會導致該抗體的漏檢；酶處理紅細胞,因為對某些血型抗原的破壞而出現假陰性反應，也可能因為蛋白酶對紅細胞膜多肽分子的消化，使其暴露出隱蔽抗原，進而與抗人球蛋白試劑中異種抗體，或血清反應液中的多凝集抗體作用出現假陽性反應。