[發(fā)明專利]一種車前草離體快速繁殖的方法

有效

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• 申請日: 2013-12-20
• 公開（公告）號: CN103704135A
• 公開（公告）日: 2014-04-09
• 發(fā)明（設計）人: 陳建榮;唐映紅;劉芳;郭清泉
• 申請（專利權）人: 長沙學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京路浩知識產(chǎn)權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

技術領域

本發(fā)明屬于植物的組織培養(yǎng)領域，具體涉及一種車前草離體快速繁殖的方法。

背景技術

車前草屬于車前草科植物，別名又為牛甜草、車前菜、車輪菜、豬耳草等，長在潮濕的環(huán)境中，如池塘、樹下、河邊、路旁等地。車前草具有食用及食療價值，富含多種維生素和蛋白質，含豐富優(yōu)良的可溶性膳食纖維。

車前草的種子和全草均可入藥，且毒副作用較小，是一種優(yōu)良的藥用植物，含有多種藥用成份，如熊果酸，車前苷、β-谷甾醇等，具有利水消腫、止瀉、清熱殺菌、明目化痰、消炎、降血壓等功效；含有的β-表馬錢酸（β-epiloganic?acid）、胡蘿卜苷和木犀草苷三種成分不但能夠能夠清除體內的氧自由基防止衰老，而且還具有抗抑郁的作用，臨床方面的應用有：治療陰道炎、治療急性乳腺炎、治療產(chǎn)后尿潴留、治療隱匿性腎炎、治療褥瘡、治療慢性活動性肝炎、治療運動性血紅蛋白尿等；還具有一定的利尿作用，可以治療血尿、感冒和腹瀉，治療婦科病（如白帶過多），治療頑固性牙痛。目前也有以車前草為原料生產(chǎn)制劑的（如軟膏，糖漿，保健含片，保健飲料等）。另外，車前草中還含有烏蘇酸B-谷甾醇、車前甙桃葉珊瑚甙、苯乙醇苷、維生素B、正三十一烷等藥用化學成分以及車前果膠、梓醇、膽堿、花生酸和亞麻酸等脂肪酸、腺嘌呤等物質。

目前對于車前草的繁殖僅有傳統(tǒng)栽培技術。但因長期過度采伐導致野生車前草逐漸減少、種子攜帶病毒，環(huán)境條件惡化導致藥用價值的差異、育種周期長、優(yōu)良品質退化和農(nóng)藥殘余量超標等諸多缺點，都已嚴重地影響了車前草的開發(fā)利用。研究車前草組織離體培養(yǎng)快速繁殖技術是解決目前車前草利用困境的有效方法。

發(fā)明內容

為解決目前車前草利用中存在的種子攜毒、繁殖周期長、品質退化、藥用價值參差不齊、農(nóng)藥殘余量超標等諸多問題，本發(fā)明提供一種車前草離體快速繁殖的方法。

本發(fā)明提供的車前草離體快速繁殖的方法，包括如下步驟：

1）愈傷組織誘導培養(yǎng)：將經(jīng)滅菌消毒的車前草葉片切去葉脈和葉緣，切成小塊，接種到愈傷組織誘導培養(yǎng)基上，常規(guī)培養(yǎng)至形成愈傷組織和不定芽；

2）生根培養(yǎng)：挑選步驟1）中芽長達2-3厘米的不定芽，將其從愈傷組織上切下，其余愈傷組織和不定芽繼續(xù)愈傷組織誘導培養(yǎng)，切下的不定芽接種到生根培養(yǎng)基上，常規(guī)培養(yǎng)至長出白色的根，獲得無菌車前草種苗。

其中，所述滅菌消毒的具體方法為：采摘無病蟲害的車前草葉片，流水沖洗，在超凈工作臺上用酒精浸泡30s，再轉入0.1%的升汞溶液中浸泡8min，用無菌水沖洗3-5次。

其中，所述小塊優(yōu)選0.8mm×0.8mm的小塊。

其中，所述愈傷組織誘導培養(yǎng)基為以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，所含蔗糖濃度為10～50g/L、萘乙酸（NAA）濃度為0.05～0.5mg/L、6-芐氨基嘌呤（6-BA）濃度為1.0～4.0mg/L的培養(yǎng)基。

優(yōu)選的，所述愈傷組織誘導培養(yǎng)基為以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，所含蔗糖濃度為30g/L、萘乙酸濃度為0.1mg/L、6-芐氨基嘌呤濃度為1.0mg/L的培養(yǎng)基，或以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，所含蔗糖濃度為30g/L、萘乙酸濃度為0.1mg/L、6-芐氨基嘌呤濃度為2.0mg/L的培養(yǎng)基。

其中，所述生根培養(yǎng)基為以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，所含蔗糖濃度為30g/L、萘乙酸濃度為0.1mg/L、6-芐氨基嘌呤濃度為2.0mg/L的培養(yǎng)基。

其中，所述常規(guī)培養(yǎng)的培養(yǎng)條件為pH值6.0，培養(yǎng)溫度25℃，光照周期12小時/天，光照強度為2000lx。

其中，所述愈傷組織誘導培養(yǎng)的時間為30天。

其中，所述生根培養(yǎng)的時間為15天。

本發(fā)明還提供所述車前草離體快速繁殖的方法在車前草繁育中的應用。

本發(fā)明的有益效果在于：

1）本發(fā)明外植體消毒效率高達80%，無菌苗生根率達100%，可快速繁殖車前草無菌種苗。

2）本發(fā)明解決了車前草植株的繁殖能力低、繁殖周期長、資源匱乏、農(nóng)藥殘留等諸多問題。

3）本發(fā)明首次采用離體快速繁殖技術對車前草進行組織培養(yǎng)，不僅可以滿足市場需求，而且還可以為工廠大規(guī)模生產(chǎn)提供有益的理論參考。

4）本發(fā)明在保護野生車前草自然資源和良好的生態(tài)環(huán)境等方面具有重要意義。

具體實施方式

以下實施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。在不背離本發(fā)明精神和實質的情況下，對本發(fā)明方法、步驟或條件所作的修改或替換，均屬于本發(fā)明的范圍。