[發明專利]PES1P基因及其表達產物的應用

在審

• 申請號: 201310706537.5
• 申請日: 2013-12-20
• 公開（公告）號: CN104726544A
• 公開（公告）日: 2015-06-24
• 發明（設計）人: 黃健;亓垚;劉星;歐瑩
• 申請（專利權）人: 上海人類基因組研究中心
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11;G01N33/68;G01N33/574
• 代理公司: 上海浦一知識產權代理有限公司 31211
• 代理人: 高月紅

技術領域

本發明涉及一種基因的應用，特別是涉及一種PES1P基因及其表達產物的應用。

背景技術

肝癌嚴重威脅著我國人民的生命健康。肝癌的診斷，尤其早期診斷是臨床診療和預后的關鍵。目前，在我國肝癌的定性診斷仍以檢測血清AFP（甲胎蛋白）為主，呈現如下特點：60%以上的肝癌病例血清AFP＞400μg/L；目前還沒有其他腫瘤標志物的特異性可與AFP相媲美；AFP檢測較少依賴影像學設備和新技術。AFP是目前全球應用最為廣泛的肝癌腫瘤標志物，已經應用了數十年，其敏感性為40%～65%，特異性為76%～96%，如此的敏感性和特異性均不令人滿意。因此，發現靈敏度和特異性高的新的腫瘤標志物將是提高肝癌早期診斷水平的關鍵。除AFP外，近年來用于肝癌檢測的其他血清標志物還包括：甲胎蛋白異質體、γ-谷氨酰轉肽酶同工酶Ⅱ（GGT-Ⅱ）、堿性磷酸酶同工酶I、醛縮酶同工酶A（ALD-A）、巖藻糖苷酶（AFU）、抗胰蛋白酶I、異常凝血酶原、鐵蛋白與酸性鐵蛋白等。AFP異質體和異常凝血酶原的應用提高了肝癌患者的檢出率，但早期診斷和指導個性化治療的分子分型診斷仍是我們面臨的極大挑戰。一般認為以下四類生物分子常作為原發性肝癌標志物：①癌胚和糖蛋白抗原；②酶和同工酶；③細胞因子；④基因。

然而，關于人PES1P基因在腫瘤的表達譜及與腫瘤發生的關系尚不清楚，有待進一步研究。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種PES1P基因及其表達產物的應用，使肝癌診斷更加準確、快速。

為解決上述技術問題，本發明提供了一種PES1P基因及其表達產物在制備診斷肝癌的產品中的應用。

所述診斷肝癌的產品包括：用RT-PCR、實時定量PCR、免疫檢測、原位雜交或基因芯片診斷肝癌的產品。

在本發明中，所述用RT-PCR診斷肝癌的產品至少包括一對特異擴增PES1P基因的引物。

所述用實時定量PCR診斷肝癌的產品至少包括一對特異擴增PES1P基因的引物。其中，用于制備用RT-PCR或實時定量PCR診斷肝癌產品中的一對特異擴增PES1P基因的引物，所述引物的上游引物序列具有如SEQ?ID?NO.1所示的序列或其互補序列，所述引物對的下游引物序列具有如SEQ?ID?NO.2所示的序列或其互補序列。

所述用免疫檢測診斷肝癌的產品包括：與PES1P蛋白特異性結合的抗體，包括多克隆抗體和單克隆抗體。

所述用原位雜交診斷肝癌的產品包括：與PES1P基因的核酸序列雜交的探針。

所述用基因芯片診斷肝癌的產品包括：與PES1P基因的核酸序列雜交的探針。

在本發明中，可以使用一系列本領域已知的方法來制備針對PES1P蛋白特異的抗體。例如，將提純的人PES1P基因產物或它的抗原片段注射入動物體內以產生多克隆抗體。同樣，表達人PES1P蛋白或它的抗原的細胞也可以用來對動物致免疫而產生抗體。根據本發明制備的抗體可以是單克隆抗體，這些單克隆抗體可用雜交瘤及時制備。本發明的抗體包括可以阻抑PES1P功能的抗體，也可以是不影響人PES1P功能的抗體。每一類抗體都可以通過對人PES1P基因產物的片段或功能域致免疫而產生，而人PES1P基因產物及其片段可以用重組方法產生或用多肽合成儀進行合成。與非修飾形式的PES1P基因產物結合的抗體，可以利用在原核細胞例如E.coli中產生的基因產物來免疫動物而得到。與翻譯后修飾形式如糖基化或磷酸化PES1P蛋白或多肽結合的抗體，可以利用在真核細胞如酵母或昆蟲細胞中產生的基因產物來免疫動物而得到。

在本發明中，所述探針可以是DNA、RNA、DNA-RNA嵌合體、PNA或其他衍生物。所述探針的長度沒有限制，只要完成特異性雜交、與目的核苷酸序列特異性結合，任何長度都可以。所述探針的長度可短至25、20、15、13或10個堿基長度。同樣，所述探針的長度可長至60、80、100、150、300個堿基對或更長，甚至整個基因。由于不同的探針長度對雜交效率、信號特異性有不同的影響，所述探針的長度通常至少是14個堿基對，最長一般不超過30個堿基對，與目的核苷酸序列互補的長度以15～25個堿基對最佳。所述探針自身互補最好少于4個堿基對，以免影響雜交效率。

本發明實驗證實PES1P基因在肝癌組織中的表達明顯高于癌旁組織，因此，PES1P基因及其表達產物（蛋白產物）可作為診斷肝癌的特異性標志基因，使肝癌診斷更加準確、快速。

附圖說明

下面結合附圖與具體實施方式對本發明作進一步詳細的說明：