[發明專利]一種編碼巰基-二硫鍵氧化還原酶基因的應用

有效

• 申請號: 201310705911.X
• 申請日: 2013-12-20
• 公開（公告）號: CN103695453B
• 公開（公告）日: 2019-06-28
• 發明（設計）人: 陸光濤;胡杰;李磊;王一諾;崔萍;陳蕾;唐紀良
• 申請（專利權）人: 廣西大學
• 主分類號: C12N15/74
• 分類號: C12N15/74;C12N1/21;C12R1/64
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1.一種編碼巰基-二硫鍵氧化還原酶的基因在黃原膠生產中的應用，其特征在于，所述編碼巰基-二硫鍵氧化還原酶的基因的DNA序列如序列表中的序列1所示，所述應用為構建及選育生產黃原膠的基因工程菌，所述基因工程菌通過將攜帶所述基因的重組質粒pL0495導入野油菜黃單胞菌野油菜變種的野生型菌株Xcc8004獲得；

所述重組質粒pL0495通過如下方法制備：根據XC_0531基因的DNA序列，設計引物C053lF：AAGCTT GCGGCAGTCAGTACTGAT；C0531R：GGATCCTCCCATGCTGAATCAAGC，引物的5′端分別加上BamHI和HindIII的酶切位點序列，以Xcc8004菌株總DNA為模板，PCR擴增該基因全長序列，將所獲得的DNA片段克隆至載體pGEM3Zf(+)中，用Sanger末端中止法對所克隆的DNA核苷酸序列進行測序驗證，將測序驗證正確的DNA片段克隆到廣譜宿主質粒pLAFR3位點上，獲得含XC_0531基因的重組質粒pL0495。

2.按照權利要求1所述的應用，其特征在于，所述序列表中序列1所示的DNA序列是所述Xcc8004菌株基因組中的一段DNA序列，由2820個核苷酸組成，含完整的編碼巰基-二硫鍵氧化還原酶的基因，自5′端的第481-2787位核苷酸為該基因的開放閱讀框，自5′端的第481-483位核苷酸為該基因的起始密碼子ATG，自5′端的第2785-2787位核苷酸為終止密碼子TGA。

3.按照權利要求1所述的應用，其特征在于，所述基因編碼的巰基-二硫鍵氧化還原酶的氨基酸序列如序列表中序列2所示，由768個氨基酸組成；該巰基-二硫鍵氧化還原酶的預測分子量為81817道爾頓，等電點為8.92。