[發(fā)明專利]全人源抗 CD26 抗體及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310704444.9
• 申請日: 2013-12-19
• 公開（公告）號: CN103709251A
• 公開（公告）日: 2014-04-09
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 馬永;周雅瓊;高云霞;黃粱敏;徐春林;陳晨;王耀方
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇眾紅生物工程創(chuàng)藥研究院有限公司;常州京森生物醫(yī)藥研究所有限公司
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;C12N15/13;C12N15/63;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;A61K39/395;A61P35/00
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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于基因工程抗體技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及一種新的可與CD26特異性結(jié)合的高親和力全人源抗體、制備方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

CD26是一種普遍存在的多功能Ⅱ型跨膜糖蛋白，具有多種生物學(xué)功能，也可以以溶解形式存在于血漿中。CD26常以同源二聚體形式存在，其單體含766個氨基酸，相對分子質(zhì)量約110kDa。氨基酸殘基從內(nèi)向外分為5個部分：胞內(nèi)區(qū)(1～6)、跨膜區(qū)(7～28)、高度糖基化區(qū)(29～323)、富含半胱氨酸區(qū)(324～551)和C端催化結(jié)構(gòu)域(552～766)，CD26分子三維結(jié)構(gòu)與功能密切相關(guān)。CD26的C端催化結(jié)構(gòu)域發(fā)揮二肽基肽酶IV(Dipeptidyl?peptidase4，DPPIV)活性，可以水解體內(nèi)多種底物發(fā)揮生物學(xué)作用，富含半胱氨酸區(qū)可以和體內(nèi)多種分子相互作用，從而參與體內(nèi)免疫功能。CD26在免疫調(diào)節(jié)中的作用已被廣泛研究，CD26是T細胞活化的分子標(biāo)志，也在T細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中作為共刺激分子，還涉及多種T細胞功能，包括T細胞發(fā)生成熟及遷移，細胞因子分泌，T細胞依賴的抗體產(chǎn)生，B細胞免疫球蛋白轉(zhuǎn)型等。CD26在自身免疫性疾病的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用，已成為臨床疾病的分子標(biāo)志，并被認為是某些免疫性疾病的治療或診斷靶點。（Ohnuma?et?al.(2011)Adv?Clin?Chem,53,51-84）

CD26由于可以和多種蛋白相互作用，如ADA、CD45、FAP-alpha等，還可以結(jié)合ECM，導(dǎo)致表達CD26細胞浸潤活性的增加或降低，可見CD26在腫瘤生物學(xué)發(fā)揮重要作用。CD26的表達量在多種的新生瘤細胞表面或血清中會升高，例如，CD26高表達于某些進攻性T細胞惡性腫瘤，惡性間皮瘤，腎瘤，某些結(jié)腸癌（Havre?et?al.(2008)Front?Biosci,13,1634-1645）。某些CD26⁺結(jié)腸癌細胞亞群，CD26⁺惡性間皮瘤細胞都有明顯腫瘤干細胞特征（Ghani?et?al.(2011)Biochem?Biophys?Res?Commun,404,735-742and?Pang?et?al.(2010)Cell?Stem?Cell,6,603-615），因此CD26可作為多種腫瘤的分子標(biāo)志。

已有多種結(jié)合CD26的鼠源抗體報道（Havre?et?al.(2008)Front?Biosci,13,1634-1645），在治療某些CD26高表達癌癥，以及抑制細胞遷移，血管形成方面都能發(fā)揮作用。有文獻報道抗CD26的鼠單克隆抗體1F7與CD26的結(jié)合導(dǎo)致細胞周期停滯在G1/S限制點，并且CD26的結(jié)合通過增強表達細胞周期調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)p21來誘導(dǎo)CD26Jurkat轉(zhuǎn)染子停滯在G1，用1F7抗體治療可以抑制CD26⁺腫瘤的形成，并在小鼠模型中增強存活率。其他抗CD26的鼠單克隆抗體E19和E26，這些抗體表現(xiàn)出抑制成纖維細胞和創(chuàng)傷細胞的細胞遷移來形成單層的抑制作用、對血管形成的抑制效果、以及對人皮膚微血管內(nèi)皮細胞的侵入和毛細管新支的形成具有抑制效果。由此可見，抗CD26單克隆抗體可通過改變CD26的活性在治療多種疾病中發(fā)揮作用。但是，鼠單克隆抗體在直接應(yīng)用于人體治療時會產(chǎn)生人抗鼠抗體反應(yīng)（Human?Anti-Mouse?Antibody,HAMA），人體會產(chǎn)生抗小鼠抗體的抗體，不僅會減弱療效，也會導(dǎo)致急性致敏反應(yīng)。為了克服鼠源單抗的缺點，基因工程抗體技術(shù)發(fā)展出了人-鼠嵌合抗體，嵌合抗體由鼠源性抗體的V區(qū)基因與人抗體的C區(qū)基因拼接為嵌合基因，使鼠源性成分減少70%左右，以及人源化抗體，在嵌合抗體的基礎(chǔ)上進一步用人抗體可變區(qū)的骨架區(qū)（FR）替代鼠FR，大大減少了抗體的鼠源成分。但殘留的少量鼠抗體的序列仍有可能潛在引發(fā)HAMA。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題：本發(fā)明旨在提供一種能有效的、特異性結(jié)合人CD26的全人源抗體，及其在制備治療以CD26的表達，特別是過量表達為特征的疾病，診斷CD26變化性表達疾病的藥物中的新用途。更具體地說：

本發(fā)明第一個目的是提供一種來源于人源的抗體或其片段，所述抗體或其片段特異性結(jié)合人CD26，優(yōu)選特異性結(jié)合CD26胞外區(qū)，所述抗體或其片段的氨基酸序列包括選自含有SEQ?ID?NO:2、SEQ?ID?NO:3、SEQ?ID?NO:4、SEQ?ID?NO:6、SEQ?ID?NO:7、SEQ?ID?NO:8一組序列的6個互補決定區(qū)的任何區(qū)域的單克隆抗體或其片段或其片段的偶聯(lián)物，或通過氨基酸置換或者修飾得到的氨基酸序列。