[發明專利]一種抗 CD26 抗體及其制備方法

有效

• 申請號: 201310704143.6
• 申請日: 2013-12-19
• 公開（公告）號: CN103694352A
• 公開（公告）日: 2014-04-02
• 發明（設計）人: 馬永;周雅瓊;高云霞;黃梁敏;徐春林;陳晨;王耀方
• 申請（專利權）人: 江蘇眾紅生物工程創藥研究院有限公司;常州京森生物醫藥研究所有限公司
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;C12N15/13;C12N15/70;C12N1/21;C12P21/02;A61K39/395;A61P35/00;A61P37/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于基因工程抗體技術領域，尤其是涉及一種新的可與CD26特異性結合的高親和力全人源抗體、制備方法及其應用。

背景技術

CD26是一種普遍存在的多功能Ⅱ型跨膜糖蛋白，具有多種生物學功能，也可以以溶解形式存在于血漿中。CD26常以同源二聚體形式存在，其單體含766個氨基酸，相對分子質量約110kDa。氨基酸殘基從內向外分為5個部分：胞內區(1～6)、跨膜區(7～28)、高度糖基化區(29～323)、富含半胱氨酸區(324～551)和C端催化結構域(552～766)，CD26分子三維結構與功能密切相關。CD26的C端催化結構域發揮二肽基肽酶IV(Dipeptidyl?peptidase4，DPPIV)活性，可以水解體內多種底物發揮生物學作用，富含半胱氨酸區可以和體內多種分子相互作用，從而參與體內免疫功能。CD26在免疫調節中的作用已被廣泛研究，CD26是T細胞活化的分子標志，也在T細胞信號轉導過程中作為共刺激分子，還涉及多種T細胞功能，包括T細胞發生成熟及遷移，細胞因子分泌，T細胞依賴的抗體產生，B細胞免疫球蛋白轉型等。CD26在自身免疫性疾病的發生發展過程中發揮重要作用，已成為臨床疾病的分子標志，并被認為是某些免疫性疾病的治療或診斷靶點。（Ohnuma?et?al.(2011)Adv?Clin?Chem,53,51-84）

CD26由于可以和多種蛋白相互作用，如ADA、CD45、FAP-alpha等，還可以結合ECM，導致表達CD26細胞浸潤活性的增加或降低，可見CD26在腫瘤生物學發揮重要作用。CD26的表達量在多種的新生瘤細胞表面或血清中會升高，例如，CD26高表達于某些進攻性T細胞惡性腫瘤，惡性間皮瘤，腎瘤，某些結腸癌（Havre?et?al.(2008)Front?Biosci,13,1634-1645）。某些CD26+結腸癌細胞亞群，CD26+惡性間皮瘤細胞都有明顯腫瘤干細胞特征（Ghani?et?al.(2011)Biochem?Biophys?Res?Commun,404,735-742and?Pang?et?al.(2010)Cell?Stem?Cell,6,603-615），因此CD26可作為多種腫瘤的分子標志。

已有多種結合CD26的鼠源抗體報道（Havre?et?al.(2008)Front?Biosci,13,1634-1645），在治療某些CD26高表達癌癥，以及抑制細胞遷移，血管形成方面都能發揮作用。有文獻報道抗CD26的鼠單克隆抗體1F7與CD26的結合導致細胞周期停滯在G1/S限制點，并且CD26的結合通過增強表達細胞周期調節蛋白質p21來誘導CD26Jurkat轉染子停滯在G1，用1F7抗體治療可以抑制CD26+腫瘤的形成，并在小鼠模型中增強存活率。其他抗CD26的鼠單克隆抗體E19和E26，這些抗體表現出抑制成纖維細胞和創傷細胞的細胞遷移來形成單層的抑制作用、對血管形成的抑制效果、以及對人皮膚微血管內皮細胞的侵入和毛細管新支的形成具有抑制效果。由此可見，抗CD26單克隆抗體可通過改變CD26的活性在治療多種疾病中發揮作用。但是，鼠單克隆抗體在直接應用于人體治療時會產生人抗鼠抗體反應（Human?Anti-Mouse?Antibody,HAMA），人體會產生抗小鼠抗體的抗體，不僅會減弱療效，也會導致急性致敏反應。為了克服鼠源單抗的缺點，基因工程抗體技術發展出了人-鼠嵌合抗體，嵌合抗體由鼠源性抗體的V區基因與人抗體的C區基因拼接為嵌合基因，使鼠源性成分減少70%左右，以及人源化抗體，在嵌合抗體的基礎上進一步用人抗體可變區的骨架區（FR）替代鼠FR，大大減少了抗體的鼠源成分。但殘留的少量鼠抗體的序列仍有可能潛在引發HAMA。

發明內容

本發明所要解決的技術問題：本發明旨在提供一種能有效的、特異性結合人CD26的全人源抗體，及其在制備治療以CD26的表達，特別是過量表達為特征的疾病，診斷CD26變化性表達疾病的藥物中的新用途。更具體地說：

本發明第一個目的是提供一種來源于人源的抗體或其片段，所述抗體或其片段特異性結合人CD26，優選特異性結合CD26胞外區，所述抗體或其片段的氨基酸序列包括選自含有SEQ?ID?NO:2、SEQ?ID?NO:3、SEQ?ID?NO:4、SEQ?ID?NO:6、SEQ?ID?NO:7、SEQ?ID?NO:8一組序列的6個互補決定區的任何區域的單克隆抗體或其片段或其片段的偶聯物，或通過氨基酸置換或者修飾得到的氨基酸序列。