[發(fā)明專利]調(diào)控YAP和/或TEAD和/或RHAMM表達(dá)水平物質(zhì)的新用途

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310704082.3
• 申請(qǐng)日: 2013-12-19
• 公開（公告）號(hào): CN103695423A
• 公開（公告）日: 2014-04-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃來強(qiáng);王中原;吳彥萍;王海峰;張揚(yáng)清
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 清華大學(xué)深圳研究生院
• 主分類號(hào): C12N15/113
• 分類號(hào): C12N15/113;C12N15/867;C12N5/10
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢;任鳳華

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及調(diào)控YAP和/或TEAD和/或RHAMM表達(dá)水平物質(zhì)的新用途。

背景技術(shù)

乳腺癌（breast?cancer）是發(fā)達(dá)國(guó)家和發(fā)展中國(guó)家女性最常見的腫瘤。全球每年有120萬婦女患乳腺癌，50萬婦女死于乳腺癌。歐美發(fā)達(dá)國(guó)家，每8-9人中就有1人患有乳腺癌。在發(fā)展中國(guó)家，由于壽命延長(zhǎng)、城鎮(zhèn)化以及采取西方生活方式，乳腺癌的發(fā)病率急劇升高。在我國(guó)，北京、上海、天津、廣州、深圳等大城市的統(tǒng)計(jì)顯示乳腺癌同樣是我國(guó)女性最常見的惡性腫瘤，且發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)。數(shù)據(jù)表明：我國(guó)女性乳腺癌發(fā)病率逐年上升，目前已經(jīng)從五年前的十萬分之十七增加到去年的十萬分之五十二，上升超過三倍；死亡率增長(zhǎng)了38.91%。其中發(fā)病率最高的是北京、上海、廣州、深圳等經(jīng)濟(jì)發(fā)達(dá)的大城市，生活水平的高低與發(fā)病率的高低成正比。目前治療乳腺癌尤其是晚期乳腺癌采用的傳統(tǒng)的手術(shù)、放療和化療療效有限，乳腺癌仍高居女性癌癥殺手的榜首。其預(yù)后同疾病范圍是否已有轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，尤其局部晚期病變的患者大多已出現(xiàn)遠(yuǎn)處器官的轉(zhuǎn)移，5年生存率僅為10～30%。因此，揭示乳腺癌進(jìn)展及癌轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制，可為研發(fā)更有效的臨床預(yù)后、療效等的生物標(biāo)志物（biomarkers）及分子靶向藥物奠定理論基礎(chǔ)，具有極重要的臨床意義。

針對(duì)乳腺癌進(jìn)展及癌轉(zhuǎn)移（progression?and?metastasis)的分子機(jī)制的研究愈來愈成為國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)。乳腺癌進(jìn)展及癌轉(zhuǎn)移涉及癌細(xì)胞的能動(dòng)性（motile)表征，而癌細(xì)胞的積極的遷移(migration)運(yùn)動(dòng)是其進(jìn)一步侵襲（invasion)周圍組織及轉(zhuǎn)移（metastasis)至淋巴組織及遠(yuǎn)處其他器官的前提，這一系列復(fù)雜過程受多種因子影響，包括多種生長(zhǎng)因子（growth?factors)、細(xì)胞因子（cytokines)、趨化因子（chemokines)以及腫瘤微環(huán)境的細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular?matrix,ECM)等。細(xì)胞外基質(zhì)成分之一的透明質(zhì)酸（Hyaluronan,HA)是含有葡萄糖醛酸及N-乙酰氨基葡萄糖的陰離子聚合體，與腫瘤侵襲與轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。而結(jié)合透明質(zhì)酸并介導(dǎo)細(xì)胞運(yùn)動(dòng)的透明質(zhì)酸介導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)受體(Receptor?for?hyaluronan-mediated?motility，RHAMM)可結(jié)合有絲分裂紡錘體而促進(jìn)細(xì)胞分裂間期微管的不穩(wěn)定性及紡錘體的完整性。獨(dú)特的是，RHAMM有可通過非經(jīng)典的途徑被輸出到細(xì)胞膜表面與CD44相互作用，從而促進(jìn)CD44-介導(dǎo)的通過結(jié)合并激活ERK1,2，進(jìn)而激活細(xì)胞能動(dòng)性相關(guān)基因的表達(dá)。

Hippo信號(hào)通路及其下游的效應(yīng)器Yes相關(guān)蛋白（Yes-associated?protein，YAP）從果蠅至哺乳動(dòng)物高度保守，在調(diào)控器官大小、組織再生及干細(xì)胞自我更新等方面發(fā)揮決定作用。YAP能夠進(jìn)入細(xì)胞核，與核內(nèi)的轉(zhuǎn)錄因子相互結(jié)合，啟動(dòng)下游靶基因的轉(zhuǎn)錄。Hippo信號(hào)通路一旦被激活，上游激酶磷酸化YAP，被磷酸化的YAP能夠與細(xì)胞骨架蛋白14-3-3相互作用，停留在胞質(zhì)內(nèi)，不能進(jìn)入細(xì)胞核激活基因轉(zhuǎn)錄。TEAD（轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)因子TEF）是細(xì)胞核內(nèi)與YAP結(jié)合最主要的轉(zhuǎn)錄因子，YAP與TEAD結(jié)合后，依賴TEAD中DNA結(jié)合功能域，啟動(dòng)下游基因轉(zhuǎn)錄。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供調(diào)控YAP和/或TEAD和/或RHAMM表達(dá)水平物質(zhì)的新用途以及調(diào)控YAP表達(dá)水平的物質(zhì)、調(diào)控TEAD表達(dá)水平的物質(zhì)和調(diào)控RHAMM表達(dá)水平的物質(zhì)。具體如下：

1、調(diào)控YAP表達(dá)水平的物質(zhì)在制備調(diào)控動(dòng)物細(xì)胞中RHAMM表達(dá)水平的產(chǎn)品（如試劑）中的應(yīng)用。

2、降低YAP表達(dá)水平的shRNA，是形成莖環(huán)結(jié)構(gòu)的短發(fā)夾RNA，所述莖環(huán)結(jié)構(gòu)中莖的一條鏈序列是SEQ?ID?No.3的第1-20位，所述莖環(huán)結(jié)構(gòu)中莖的另一條鏈序列與SEQ?ID?No.3的第1-20位反向互補(bǔ)。

3、2中所述降低YAP表達(dá)水平的shRNA的相關(guān)生物材料，為下述A1）-A9）中的任一種：

A1）2中所述降低YAP表達(dá)水平的shRNA產(chǎn)生的siRNA；

A2）表達(dá)A1）所述siRNA的表達(dá)載體；

A3）表達(dá)A1）所述siRNA的重組微生物細(xì)胞；

A4）表達(dá)A1）所述siRNA的重組動(dòng)物細(xì)胞；

A5）表達(dá)A1）所述siRNA的重組植物細(xì)胞；

A6）表達(dá)2中所述shRNA的表達(dá)載體；