[發(fā)明專利]一種大黃魚肌肉細胞系及其建立方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201310703857.5 | 申請日： | 2013-12-19 |
| 公開（公告）號： | CN104004707A | 公開（公告）日： | 2014-08-27 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 王藝磊;莊道華;張子平;李敏 | 申請（專利權(quán)）人： | 集美大學(xué) |
| 主分類號： | C12N5/071 | 分類號： | C12N5/071;C12R1/91 |
| 代理公司： | 廈門市首創(chuàng)君合專利事務(wù)所有限公司 35204 | 代理人： | 李雁翔 |
| 地址： | 361021 福*** | 國省代碼： | 福建;35 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 大黃魚 肌肉 細胞系 及其 建立 方法 | ||
1.一種大黃魚肌肉細胞系，其特征在于：該細胞系于2013年10月31日保藏在中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏登記入冊編號為：CCTCC?NO:C2013158。?
2.一種權(quán)利要求1所述的大黃魚肌肉細胞系的建立方法，其特征在于：包括如下步驟：?
（1）大黃魚肌肉組織的獲?。簩?個月大，長9-11cm的大黃魚魚苗在含青霉素及鏈霉素雙抗的滅菌海水中暫養(yǎng)1-1.5小時，然后滴入占滅菌海水體積0.005-0.015%的丁香酚，直至魚體翻轉(zhuǎn)，腹部朝上，對刺激物應(yīng)激行為為止；以滅菌紗布塊擦除魚體表面粘液，以浸有酒精的棉球擦拭魚體表面后，取出大黃魚肌肉組織并置于含青霉素及鏈霉素雙抗的D-hanks液中；?
（2）原代培養(yǎng)：將上述大黃魚肌肉組織切碎至0.7-2.0mm3的小組織塊，以D-hanks液漂洗，最后以完全培養(yǎng)液洗；漂洗后將上述小組織塊接種于細胞培養(yǎng)瓶中，吸除多余培養(yǎng)液，翻轉(zhuǎn)瓶身27℃恒溫干貼24小時，再加入完全培養(yǎng)液翻正瓶身以使小組織塊浸入培養(yǎng)液中，于27℃恒溫培養(yǎng)啟動原代培養(yǎng)，每周更換完全培養(yǎng)液一次；?
（3）傳代培養(yǎng)：原代培養(yǎng)至貼壁細胞增殖至至少50-60%覆蓋率時，移除舊培養(yǎng)液,并清洗去除殘留的血清和二價金屬離子；然后以0.25%胰酶消化法傳代懸起細胞，以1:2-10進行傳代；以后每隔2-8天傳代一次，所述大黃魚肌肉細胞系建立成功。?
3.如權(quán)利要求2所述的一種大黃魚肌肉細胞系的建立方法，其特征在于：所述完全培養(yǎng)液中包括：DMEM/F12培養(yǎng)液、胎牛血清FBS、β-巰基乙醇、N-乙酰葡糖糖胺、羧甲基纖維素鈉、人FGF-basic、人EGF、人HGF、青霉素及鏈霉素。?
4.如權(quán)利要求3所述的一種大黃魚肌肉細胞系的建立方法，其特征在于：所述完全培養(yǎng)液為：以DMEM/F12培養(yǎng)液為基礎(chǔ)，包括終濃度分別為16.7%胎牛血清FBS、0.5‰β-巰基乙醇、50μg/mL?N-乙酰葡糖糖胺、50μg/mL羧甲基纖維素鈉、10μg/L人FGF-basic、5μg/L人EGF、1μg/L人HGF、100IU/mL青霉素以及100μg/mL鏈霉素。?
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