[發明專利]一種豬偽狂犬病病毒變異株PRV-ZJ01及應用

有效

• 申請號: 201310701688.1
• 申請日: 2013-12-19
• 公開（公告）號: CN103627678A
• 公開（公告）日: 2014-03-12
• 發明（設計）人: 姜平;顧真慶;白娟
• 申請（專利權）人: 姜平
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;A61K39/245;A61P31/22;C12R1/93
• 代理公司: 濟南泉城專利商標事務所 37218
• 代理人: 李桂存

技術領域????

本發明涉及豬偽狂犬病毒技術領域，特別涉及一種豬偽狂犬病毒變異株PRV-ZJ01，還涉及豬偽狂犬病毒變異株PRV-ZJ01的應用。

背景技術???

偽狂犬病毒（PRV）屬于皰疹病毒科甲型皰疹病毒亞科成員，可引起新生仔豬中樞神經系統紊亂，生長豬呼吸道癥狀，并能導致妊娠母豬流產、死胎與弱仔。美國與部分歐洲國家已宣布消滅和根除該病。我國廣泛使用該病基因缺失弱毒疫苗有效控制并逐步凈化。但是，自2011年底起，我國很多該病免疫豬場相繼出現仔豬嘔吐和神經癥狀、生長豬出現呼吸道癥狀，死亡率明顯增高，妊娠母豬出現流產、死胎、弱仔等，造成嚴重經濟損失，但對流行毒株的致病性和抗原性均不清楚。

發明內容???

為了解決以上現有技術中存在的疫情不能得到有效控制的問題，本發明提供了一種豬偽狂犬病毒變異株PRV-ZJ01。

本發明還提供了所述豬偽狂犬病毒變異株PRV-ZJ01在制備免疫疫苗的應用。

本發明是通過以下步驟得到的：

一種豬偽狂犬病病毒變異株PRV-ZJ01，其保藏號為CGMCC?No.8170。采用10^6.0TCID₅₀滴鼻感染85日齡健康豬，非免疫豬全部發病和死亡。

所述的豬偽狂犬病病毒變異株PRV-ZJ01在制備疫苗中的應用。

優選所述疫苗為水溶性滅活疫苗。

疫苗的制備過程為：取PRV-ZJ01病毒液滅活，加入卡波姆佐劑混合均勻即得。病毒液中病毒含量為10^7.0TCID₅₀/mL。

疫苗中病毒抗原含量大于10^6.0TCID₅₀/mL。

本研究采集我國某發病豬群患病仔豬腦組織病料，無菌處理后接種BHK21細胞，盲傳2代，培養2~3天出現明顯細胞病變，病毒空斑純化3次后連續傳代15次，均出現相同病變，病毒TCID₅₀為10^-7.5/mL，PCR鑒定為PRV，命名為PRV-ZJ01毒株。病毒gE和gB基因序列測定結果顯示其與其他已公布的毒株序列同源性分別為97.1%~99.6%和98.1%~99.5%，其gE基因推導的氨基酸序列在第54和448位發生D-I和V-I突變，第496位插入D。采用10頭24日齡仔豬進行人工感染發病試驗，結果顯示，該分離株可引起PRV典型臨床癥狀和病理變化，100%死亡。采用24頭85日齡健康育肥豬滴鼻接種10^2?.0TCID₅₀?~10^6.0?TCID₅₀?PRV-ZJ01株病毒液，結果為，攻毒組豬均出現發熱，精神沉郁，嘔吐，咳嗽，呼吸困難和神經癥狀等典型癥狀，10^6.0?TCID₅₀病毒感染組豬在攻毒后7天內全部死亡，病毒LD₅₀為10^3.13?TCID₅₀/mL。該毒株與50份Bartha-K61、Bucharest、HB-98疫苗毒株血清及其抗血清交叉中和試驗，結果顯示，該分離毒株抗原發生明顯變異，變異系數R值為0.378~0.448，首次證明PRV-ZJ01毒株為PRV超強毒抗原變異毒株，屬于血清2亞型超強毒株。

本發明的有益效果：采用PRV-ZJ01株病毒液（10^6.0TCID₅₀/mL）制成水包油型滅活疫苗，與Bartha-K61活疫苗進行豬體免疫保護試驗，結果表明，ZJ01毒株滅活疫苗安全性較好，免疫保護效率明顯高于Bartha-K61活疫苗免疫組，Bartha-K61活疫苗對ZJ01超強毒株不能提供完全保護。證明該病毒株具有較好免疫原性，可用于該病疫苗和診斷方法研究與開發。

菌株保藏信息

保藏時間：2013年9月18日，

保藏單位：中國微生物菌株保藏管理委員會普通微生物中心（CGMCC），

保藏編號：CGMCC?No.8170，

保藏單位地址：中國科學院微生物研究所，北京市朝陽區北辰西路1號院3號，

分類命名：豬偽狂犬病毒。

附圖說明???