[發(fā)明專(zhuān)利]楊樹(shù)耐鹽基因PtoeIF5A1的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310700593.8
• 申請(qǐng)日: 2013-12-18
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103709238A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-04-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張杰偉;魏建華;王宏芝;李瑞芬;張中保;陳亞娟;丁莉萍
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 北京市農(nóng)林科學(xué)院
• 主分類(lèi)號(hào): C07K14/415
• 分類(lèi)號(hào): C07K14/415;C12N15/29;C12N15/82;A01H5/00
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢;陳曉慶

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種楊樹(shù)耐鹽基因PtoeIF5A1的應(yīng)用。

背景技術(shù)

eIF5A是在真核生物中廣泛存在的一類(lèi)蛋白質(zhì)，研究表明，eIF5A是唯一含有羧腐胺賴(lài)氨酸（hypusine）殘基的蛋白質(zhì)。進(jìn)化分析顯示，eIF5A在各物種間高度保守。實(shí)驗(yàn)表明，eIF5A參與了細(xì)胞的多項(xiàng)生理活動(dòng)，如細(xì)胞增殖、蛋白質(zhì)翻譯、細(xì)胞衰老與凋亡等。在酵母體內(nèi)，當(dāng)eIF5A功能受到抑制或缺失時(shí)，部分蛋白合成減少。eIF5A的活性受到抑制時(shí)，細(xì)胞的生長(zhǎng)延緩或停滯。

植物中eIF5A確切的生物學(xué)功能還不明確。Thompson等研究發(fā)現(xiàn)擬南芥中存在3個(gè)表達(dá)特征不同的eIF5A編碼基因，AteIF5A1，AteIF5A2和AteIF5A3。Western?Blotting分析表明，AteIF5A1只在衰老組織中表達(dá)，AteIF5A2在受機(jī)械損傷的組織中高水平表達(dá)，而AteIF5A3在細(xì)胞分裂很活躍的吸脹的種子中高水平表達(dá)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種楊樹(shù)耐鹽基因PtoeIF5A1的應(yīng)用。

本發(fā)明提供了如下任一物質(zhì)在提高植物耐鹽性中的應(yīng)用：

（1）SEQ?ID?No.2所示的蛋白質(zhì)；

（2）SEQ?ID?No.2所示蛋白質(zhì)的編碼基因；

（3）含有（2）的重組載體、表達(dá)盒、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系或重組菌。

上述應(yīng)用中，所述SEQ?ID?No.2所示蛋白質(zhì)的編碼基因如SEQ?ID?No.1所示。

上述任一所述的應(yīng)用中，所述耐鹽性為耐NaCl的性質(zhì)。

上述任一所述的應(yīng)用中，所述提高植物耐鹽性是指所述植物在含NaCl條件下的生長(zhǎng)狀態(tài)好；和/或，在含NaCl條件下的種子萌發(fā)率高；

所述生長(zhǎng)狀態(tài)好是指所述植物的葉片較大、顏色較綠；

上述任一所述的應(yīng)用中，所述植物為擬南芥。

一種制備耐鹽性提高的轉(zhuǎn)基因植物的方法也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍，包括如下步驟：將SEQ?ID?No.2所示蛋白質(zhì)的編碼基因?qū)氤霭l(fā)植物中，得到轉(zhuǎn)基因植物；與出發(fā)植物相比，轉(zhuǎn)基因植物的耐鹽性增強(qiáng)。

上述方法中，所述編碼基因是通過(guò)重組表達(dá)載體導(dǎo)入的，所述重組表達(dá)載體是將所述編碼基因插入出發(fā)載體pBI121的多克隆位點(diǎn)得到的。

上述任一所述的方法中，所述轉(zhuǎn)基因植物的耐鹽性增強(qiáng)是指所述轉(zhuǎn)基因植物在含NaCl條件下的生長(zhǎng)狀態(tài)好于出發(fā)植物在含NaCl條件下的生長(zhǎng)狀態(tài)；和/或，轉(zhuǎn)基因植物的種子在含NaCl條件下的萌發(fā)率高于出發(fā)植物在含NaCl條件下的萌發(fā)率。

所述NaCl的濃度為150mM-175mM。

上述任一所述的方法中，所述植物為擬南芥。

上述任一所述的方法中，所述耐鹽性為耐NaCl的性質(zhì)。

本發(fā)明證明了PtoeIF5A1基因有耐受高鹽的能力，該基因在使用基因工程手段提高林木或者作物耐鹽方面具有應(yīng)用價(jià)值。

附圖說(shuō)明

圖1為Western-Blotting檢測(cè)PtoeIF5A1蛋白在轉(zhuǎn)基因擬南芥T0代植株以及對(duì)照擬南芥T0代植株中的表達(dá)。

圖2為實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)PtoeIF5A1基因的表達(dá)。

圖3為T(mén)2代純合轉(zhuǎn)PtoeIF5A1基因的擬南芥以及T2代純合轉(zhuǎn)空載體pBI121擬南芥的耐鹽性檢測(cè)以及PtoeIF5A1蛋白的Western-Blotting檢測(cè)。

圖4為種子萌發(fā)實(shí)驗(yàn)。

具體實(shí)施方式

下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法。

下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無(wú)特殊說(shuō)明，均可從商業(yè)途徑得到。

塔形毛白楊CV-BJHR01（Populus?tomentosa?Carr.cv‘BJHR01’）在文獻(xiàn)“張利姣,張杰偉,陳亞娟,等.毛白楊真核細(xì)胞翻譯起始因子5A基因(PtoeIF5A4)的克隆與表達(dá)分析[J].Journal?of?Agricultural?Biotechnology,2013,21(8):949-956.”中公開(kāi)過(guò)，公眾可從北京市農(nóng)林科學(xué)院獲得。