[發明專利]豬毛發中西馬特羅殘留量的檢測方法

有效

• 申請號: 201310698917.9
• 申請日: 2013-12-18
• 公開（公告）號: CN103675145A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發明（設計）人: 潘艷坤;張蘭;葉開富;楊益林;黃一凡;謝濤;張思敏;劉永強
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區分析測試研究中心
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 廣西南寧匯博專利代理有限公司 45114
• 代理人: 朱萍球

技術領域

本發明涉及檢測領域，具體涉及一種豬毛發中西馬特羅殘留量的檢測方法。

背景技術

瘦肉精是具有腎上腺素受體激動作用的一類藥物的統稱，又稱β2-興奮劑，具有促進肌肉生長、提高瘦肉率的作用，曾作為生長添加劑被廣泛關注，但β2-受體激動劑在動物體內有一定的殘留時間，通過食物鏈進入人體后會使一些易感人群產生明顯的中毒癥狀，危害人類健康。西馬特羅（Cimaterol）是目前常見的瘦肉精之一。我國于2002年農業部176號公告《禁止在飼料和動物飲用水中使用的藥物品種目錄》中已明令禁止西馬特羅在畜禽生產上的使用，但受經濟利益驅使，西馬特羅在畜禽生產上的使用仍然屢禁不止。

目前國家或行業部門已出臺了多項動物源性食品或尿液中的西馬特羅殘留量檢測標準，豬及其肉制品中的西馬特羅的檢測方法也多見報導。如孫雷等（高效液相色譜-串聯質譜法檢測豬尿中四種β-受體激動劑殘留的研究.中國獸藥雜志，2008,42（4）：15-18）建立了豬尿中克侖特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇和西馬特羅殘留檢測的高效液相色譜-串聯質譜方法，液相色譜條件為:色譜柱為XBridge?C18柱(150mm?x2.1mm,5μm)，流動相為0.1%甲酸甲醇溶液+0.1%甲酸水溶液，梯度洗脫，柱溫為30℃，流速為0.2mL/min，進樣量為20μL；質譜條件為:電噴霧離子源(ESI)，多反應監測(MRM)方式進行采集，同位素內標法定量；結果表明，四種β-受體激動劑在1-50ng/mL濃度范圍內呈現良好的線性關系，方法檢測限為0.3ng/mL，定量限為0.5ng/mL，該方法快速、簡便、專屬性強、靈敏度高。

但西馬特羅在食用組織或尿液中半衰期較短，在一定休藥期后將無法在肌肉或內臟組織中被檢測出來，因此無法準確監控畜禽生產過程中是否使用過此類違禁藥物，這給食品安全生產的監管帶來一定困難。而毛發因為其結構成分特點和較低的代謝活性，使得藥物進入其中后代謝緩慢，可長期蓄積保留，在動物毛發中具有較長的殘留時間，因此毛發較畜禽產品的肌肉組織、肝臟及尿液更適合做為有效的檢測樣本為食品安全生產中違禁藥物監管提供更可靠的確證依據。目前，尚未見有采用高效液相色譜-串聯質譜法檢測豬毛發中西馬特羅的含量。

發明內容

本發明針對西馬特羅在食用組織或尿液中半衰期較短，不利于食品安全生產監管的現狀，提供了一種豬毛發中西馬特羅殘留量的檢測方法，通過采集豬毛，進行簡單前處理檢測豬毛發中西馬特羅殘留量，無需宰殺生豬，實現動物活體檢測，毛發樣本較尿液也更方便獲取。該方法檢測步驟操作簡便，特異性強、靈敏度高，檢測結果準確可靠，為畜禽食品安全生產的監管提供可靠的控制確證技術。

本發明的技術方案為：

一種豬毛發中西馬特羅殘留量的檢測方法，該方法包括以下步驟：

1.供試品溶液的制備：

a.清洗：取豬毛發樣品，用清洗劑清洗，蒸餾水漂凈，烘干或晾干；

b.水解：取清洗好的豬毛發樣品剪碎，稱取0.2g至50mL塑料離心管中，加入0.5mol·L^-1氫氧化鈉溶液5mL、內標溶液，置于50℃水浴鍋中恒溫2小時，得豬毛發水解液；

c.提取：在豬毛發水解液中加入鹽酸，再用鹽酸調節pH值至9.8±0.2，加入氯化鈉，用10mL乙酸乙酯-異丙醇（3:2）混合溶液提取，離心，轉移上層有機相至圓底燒瓶中，再用5mL乙酸乙酯-異丙醇（3:2）混合溶液提取下層水相，離心，合并有機相，在40℃水浴下減壓濃縮近干，加入2mL0.1mol·L^-1鹽酸溶解殘渣，得備用液；

d.凈化：取備用液過PCX固相萃取柱，依次用30mmol·L^-1鹽酸、甲醇各3mL淋洗，抽干，再用5%氨水甲醇溶液5mL洗脫，洗脫液吹干，用1:1的乙腈-水溶液0.2mL溶解，作為供試品溶液；

2.高效液相色譜-串聯質譜法檢測：

a.液相色譜條件：色譜柱：CAPCELL?PAK?CR柱，2.1mm×150mm，粒度5μm；流動相A為含0.1%甲酸的10mmol·L^-1乙酸銨水溶液，流動B為含0.1%甲酸的乙腈，流動相A:流動B為55:45；流速：0.2mL/min；柱溫：30℃；進樣量：20μL；

b.質譜條件：電噴霧離子源（ESI），正離子掃描模式；選擇反應監測（SRM）；噴霧電壓：3500V；毛細管溫度：350℃蒸發溫度：100℃；鞘氣壓力3.67kPa，輔助氣流量5L·min^-1。